固定化酪氨酸酶的制備及部分性質(zhì)研究.pdf

1、本文以殼聚糖為載體，戊二醛為交聯(lián)劑，對制備固定化酪氨酸酶的條件以及固定化酶的性質(zhì)進(jìn)行了研究，得到以下結(jié)論：　　1.試驗結(jié)果表明：固定化酪氨酸酶最佳條件是戊二醛的濃度為3％(V/V)，溶液pH=8.0，給酶量為105U/g載體。　　2.通過對比酪氨酸酶固定前后的性質(zhì)發(fā)現(xiàn)，固定化反應(yīng)使酶最佳pH值降低，最佳溫度升高。固定化酶的耐熱性和重復(fù)使用穩(wěn)定性較溶液酶均得到較大的提高?！　?.研究發(fā)現(xiàn)，當(dāng)載體與戊二醛交聯(lián)后，是否再經(jīng)甲醛處理，對固

2、定化酶的穩(wěn)定性影響最大：如果載體經(jīng)甲醛處理完后，再與酶反應(yīng)，得到的固定化酶顯示出很高的使用穩(wěn)定性，在25℃分別使用50次后，固定化酶的活力只下降了2.13％，而未經(jīng)甲醛處理的載體得到的固定化酶在25℃下使用50次后，固定化酶的活力則下降了40.39％。用甲醛處理后得到的固定化酶，固定化率達(dá)到66.2％，酶活力回收率為44.9％　　4.通過對固定化酶的可見-紫外吸收光譜和SEM圖譜分析發(fā)現(xiàn)，載體經(jīng)過甲醛處理，能使載體上剩余氨基被遮蔽，避

3、免氨基對反應(yīng)中間物多巴醌的吸附，從而增大酶在催化底物時的傳質(zhì)阻力，導(dǎo)致酶催化反應(yīng)速度逐漸下降。　　5.對酶的動力學(xué)參數(shù)進(jìn)行了測定，發(fā)現(xiàn)固定化酶的Km比溶液酶的Km增加了14％，即固定化反應(yīng)使酶促反應(yīng)的速度相應(yīng)地有所下降?！　?.通過研究以固定化酪氨酸酶修飾鉑電極構(gòu)成電流型生物傳感器測定水中酚類物質(zhì)的方法研究，發(fā)現(xiàn)在外加電壓為-170mV(vs.SCE)，pH值為5.0的磷酸鹽緩沖溶液中，在濃度為1.0×10-7～2.0×10-5mo