聚肌胞苷酸加重三氯乙烯致敏誘導的肝臟損傷.pdf

1、研究背景：三氯乙烯（trichloroethylene, TCE）是一種常見有機溶劑，接觸一段時間TCE的工人可能發(fā)生職業(yè)性三氯乙烯藥疹樣皮炎（occupational dermatitis medicamentosa-like of trichloroethylene, ODMLT），伴發(fā)嚴重的肝臟損傷。臨床觀察中發(fā)現(xiàn)ODMLT病人在發(fā)病前期常出現(xiàn)頭痛、發(fā)熱等病毒性全身感染的癥狀。此外有研究指出病人血清中抗病毒抗體滴度顯著升高，皰疹病

2、毒和巨細胞病毒出現(xiàn)再次激活，佐證了ODMLT與病毒感染密切相關這一現(xiàn)象。前期動物實驗表明TCE致敏小鼠肝臟發(fā)生免疫損傷，補體激活參與其中。同時相關基礎研究提示病毒模擬物聚肌胞苷酸（polyinosine-polycytidylic acid, poly(I:C)）可以通過激活Toll樣受體-3上調局部B因子水平以促進補體從旁路途徑激活。本次研究探討了腹腔注射poly(I:C)是否可以通過促進補體激活加重TCE致敏導致的肝臟免疫損傷，嘗試

3、解釋臨床中病情與病毒感染之間在機制上的聯(lián)系。
　　研究目的：以TCE致敏小鼠模型為基礎，采用腹腔注射poly(I:C)模擬病人發(fā)病前的全身病毒感染狀態(tài)，觀察該處理是否加重TCE致敏介導的小鼠肝臟損傷，檢測肝臟局部補體激活程度，探索補體是否參與該免疫損傷放大的過程。
　　研究方法：購買40只6-8周雌性BALB/c小鼠，經(jīng)適應性飼養(yǎng)后分為溶劑對照組（n=5）、poly(I:C)對照組（n=5）、TCE處理組（n=15）和聯(lián)合處

4、理組（n=15），聯(lián)合處理組小鼠于末次TCE激發(fā)前3小時腹腔注射50μg poly(I:C)。末次激發(fā)后48小時根據(jù)皮膚致敏反應評分將小鼠分為致敏或未致敏組，隨后麻醉、處死小鼠，收集血清、肝臟。采用全自動生化儀檢測肝功能指標ALT和AST，免疫比濁法測定血清補體C3水平，HE染色法觀察小鼠肝臟病理學損傷程度，免疫組化法檢測肝臟局部補體激活水平和細胞因子沉積水平，Real-time RT-PCR檢測肝臟補體C3、補體調節(jié)蛋白和B因子的基因

5、轉錄水平，Western Blotting檢測肝臟B因子的蛋白表達相對量。
　　結果：
　　1.皮膚致敏反應評判：溶劑對照組和poly(I:C)對照組小鼠背部均未發(fā)現(xiàn)皮炎反應。TCE處理組致敏率6/15(40.0％)，聯(lián)合處理組致敏率5/15(33.3%)，兩者間無統(tǒng)計學差異。
　　2.肝臟解剖學外觀評價和臟器系數(shù)比較：溶劑對照組和poly(I:C)對照組肝臟未發(fā)現(xiàn)明顯病變。非致敏組肝臟也未見明顯異常。TCE致敏組肝臟

6、腫大，臟器系數(shù)顯著高于溶劑對照組（P<0.05）。聯(lián)合處理致敏組肝臟呈黃褐色、質脆易碎，體積腫大，臟器系數(shù)顯著高于溶劑對照組（P<0.05）。
　　3.肝臟病理學研究：溶劑對照組和poly(I:C)對照組肝臟切片未見病理學異常。非致敏組肝臟未見病理學損傷。TCE致敏組肝臟偶見肝細胞腫大和匯管區(qū)炎細胞浸潤。聯(lián)合處理組肝臟肝細胞水腫明顯，常見氣球樣變性，匯管區(qū)常見中性粒細胞浸潤。
　　4.肝功能指標檢測結果：poly(I:C)對

7、照組血清ALT和AST水平較溶劑對照組水平無統(tǒng)計學差異。非致敏組肝功能水平較溶劑對照組無統(tǒng)計學差異。TCE致敏組血清ALT和AST均輕微升高，顯著高于溶劑對照組水平（P<0.05）。聯(lián)合處理致敏組ALT和AST均明顯升高，顯著高于溶劑對照組和TCE致敏組水平（P<0.05）。
　　5.肝臟細胞因子沉積水平檢測：溶劑對照組、poly(I:C)對照組、非致敏組肝臟未檢測到TNF-α、IL-1β和IL-6的沉積。TCE致敏組和聯(lián)合處理組

8、均發(fā)現(xiàn)三種蛋白的沉積，其中以TNF-α表達居多，三種蛋白表達水平在兩組中無顯著差異。
　　6.血清補體C3含量比較：與溶劑對照組水平相比，poly(I:C)對照組和TCE致敏組血清C3水平均無統(tǒng)計學差異。聯(lián)合處理致敏組水平較溶劑對照組和TCE致敏組水平顯著下降（P<0.05）。
　　7.肝臟C3轉錄能力比較：與溶劑對照組肝臟C3轉錄水平相比，poly(I:C)對照組、TCE致敏組和聯(lián)合致敏組肝臟C3轉錄水平均無顯著上調或下調

9、。
　　8.肝臟局部補體激活水平檢測：溶劑對照組、poly(I:C)對照組、非致敏組肝臟未檢測到補體激活。TCE致敏組肝臟有少量C3片段和MAC沉積。聯(lián)合處理致敏組肝臟有大量補體激活標志性蛋白表達。
　　9.肝臟補體調節(jié)蛋白表達比較：與溶劑對照組比較，poly(I:C)對照組和聯(lián)合處理致敏組的四種補體調節(jié)蛋白（CD55、CD59、CD46和Crry）的轉錄水平均無顯著變化，而TCE致敏組肝臟CD59、CD46和Crry的轉錄

10、水平顯著下降（P<0.05）。
　　10.肝臟B因子表達比較：與溶劑對照組比較，poly(I:C)對照組和TCE致敏組肝臟B因子表達水平無明顯差異。而聯(lián)合處理致敏組肝臟B因子顯著上調（P<0.05）。
　　結論：
　　1.腹腔注射poly(I:C)顯著加劇TCE致敏誘導的肝臟損傷；
　　2. TCE致敏組肝臟補體激活上調，可能由調節(jié)蛋白水平顯著下降引起；
　　3.聯(lián)合處理致敏組肝臟局部補體激活水平顯著上升，