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文檔簡介
1、目的:(1)建立高速逆流色譜(High-speedcounter-currentchromatography,HSCCC)與大孔樹脂層析柱結合的方法,用于仙鶴草藥效物質的分離純化;(2)建立多指標成分定量以及指紋圖譜分析法對仙鶴草進行質量控制研究。
方法:(1)首先將仙鶴草乙醇提取物進行大孔樹脂柱層析分離,得到不同濃度的初分產物;然后采用HSCCC在優(yōu)化分離條件下,對各初分產物再進行分離純化,得到相應化合物;這些物質經過標
2、準品對照、質譜(MS)、紫外(UV)和核磁共振(NMR)法進行結構鑒定,還要通過HPLC檢測進行純度分析。(2)在獲取的藥效物質基礎上,采用HPLC法進行多指標成分測定和指紋圖譜分析,對16個批次的仙鶴草藥材進行質量控制研究。
結果:(1)采用D101大孔樹脂對500g仙鶴草藥材的粗提物進行初步分離,得到20%、40%、50%和60%乙醇洗脫液,蒸干后分別得到相應的初產物1(8.0g)、2(13.3g)、3(3.6g)和4
3、(5.3g)。初產物1采用乙酸乙酯-正丁醇-水(1∶4∶5,v/v)溶劑系統經HSCCC分離得到化合物花旗松素3-O-葡萄糖苷(6.4mg,純度:94.24%);初產物2采用乙酸乙酯-水(1∶1,v/v)溶劑系統經HSCCC分離得到槲皮苷(13.0mg,純度:95.37%);初產物3采用正已烷-乙酸乙酯-甲醇-水(1∶5∶1∶5,v/v)溶劑系統經HSCCC分離得到銀椴苷(14.7mg,純度:97.42%)和仙鶴草內酯(21.4mg,純
4、度:95.29%);初產物4采用乙酸乙酯-正丁醇-水(1∶4∶5,v/v)溶劑系統經HSCCC分離得到委陵菜酸(29.8mg,純度:96.34%)。(2)建立了一種可以有效控制仙鶴草質量的HPLC法,并采用此方法對16個批次的仙鶴草中蘆丁、槲皮苷、木犀草苷、銀椴苷、芹菜素、山柰酚和仙鶴草內酯等7種成分的含量進行了測定。并且對這些產地的仙鶴草進行了指紋圖譜分析,根據指紋圖譜中的11共有峰的相對峰面積對16個批次的仙鶴草藥材進行了相似度評價
5、和層序聚類分析。
結論:(1)本實驗采用HSCCC對仙鶴草進行有效物質的分離,首次同時從仙鶴草中分離得到花旗松素3-O-葡萄糖苷、槲皮苷、銀椴苷、仙鶴草內酯和委陵菜酸5種高純度單體化合物。建立了對仙鶴草中生物活性成份分離純化的有效方法,并且進一步證明了HSCCC是一種藥用植物中天然化合物分離的有效技術。(2)基于得到的物質基礎,首次通過反相HPLC對16個批次仙鶴草中7種有效成份進行定量分析。同時結合仙鶴草的指紋圖譜對不同
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