仙鶴草藥效物質(zhì)的現(xiàn)代分離分析研究.pdf

1、目的:(1)建立高速逆流色譜(High-speedcounter-currentchromatography，HSCCC)與大孔樹脂層析柱結(jié)合的方法，用于仙鶴草藥效物質(zhì)的分離純化;(2)建立多指標(biāo)成分定量以及指紋圖譜分析法對(duì)仙鶴草進(jìn)行質(zhì)量控制研究。
　　 方法:(1)首先將仙鶴草乙醇提取物進(jìn)行大孔樹脂柱層析分離，得到不同濃度的初分產(chǎn)物;然后采用HSCCC在優(yōu)化分離條件下，對(duì)各初分產(chǎn)物再進(jìn)行分離純化，得到相應(yīng)化合物;這些物質(zhì)經(jīng)過標(biāo)

2、準(zhǔn)品對(duì)照、質(zhì)譜(MS)、紫外(UV)和核磁共振(NMR)法進(jìn)行結(jié)構(gòu)鑒定，還要通過HPLC檢測(cè)進(jìn)行純度分析。(2)在獲取的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)上，采用HPLC法進(jìn)行多指標(biāo)成分測(cè)定和指紋圖譜分析，對(duì)16個(gè)批次的仙鶴草藥材進(jìn)行質(zhì)量控制研究。
　　 結(jié)果:(1)采用D101大孔樹脂對(duì)500g仙鶴草藥材的粗提物進(jìn)行初步分離，得到20％、40％、50％和60％乙醇洗脫液，蒸干后分別得到相應(yīng)的初產(chǎn)物1(8.0g)、2(13.3g)、3(3.6g)和4

3、(5.3g)。初產(chǎn)物1采用乙酸乙酯-正丁醇-水(1∶4∶5，v/v)溶劑系統(tǒng)經(jīng)HSCCC分離得到化合物花旗松素3-O-葡萄糖苷(6.4mg，純度:94.24％);初產(chǎn)物2采用乙酸乙酯-水(1∶1，v/v)溶劑系統(tǒng)經(jīng)HSCCC分離得到槲皮苷(13.0mg，純度:95.37％);初產(chǎn)物3采用正已烷-乙酸乙酯-甲醇-水(1∶5∶1∶5，v/v)溶劑系統(tǒng)經(jīng)HSCCC分離得到銀椴苷(14.7mg，純度:97.42％)和仙鶴草內(nèi)酯(21.4mg，純

4、度:95.29％);初產(chǎn)物4采用乙酸乙酯-正丁醇-水(1∶4∶5，v/v)溶劑系統(tǒng)經(jīng)HSCCC分離得到委陵菜酸(29.8mg，純度:96.34％)。(2)建立了一種可以有效控制仙鶴草質(zhì)量的HPLC法，并采用此方法對(duì)16個(gè)批次的仙鶴草中蘆丁、槲皮苷、木犀草苷、銀椴苷、芹菜素、山柰酚和仙鶴草內(nèi)酯等7種成分的含量進(jìn)行了測(cè)定。并且對(duì)這些產(chǎn)地的仙鶴草進(jìn)行了指紋圖譜分析，根據(jù)指紋圖譜中的11共有峰的相對(duì)峰面積對(duì)16個(gè)批次的仙鶴草藥材進(jìn)行了相似度評(píng)價(jià)

5、和層序聚類分析。
　　 結(jié)論:(1)本實(shí)驗(yàn)采用HSCCC對(duì)仙鶴草進(jìn)行有效物質(zhì)的分離，首次同時(shí)從仙鶴草中分離得到花旗松素3-O-葡萄糖苷、槲皮苷、銀椴苷、仙鶴草內(nèi)酯和委陵菜酸5種高純度單體化合物。建立了對(duì)仙鶴草中生物活性成份分離純化的有效方法，并且進(jìn)一步證明了HSCCC是一種藥用植物中天然化合物分離的有效技術(shù)。(2)基于得到的物質(zhì)基礎(chǔ)，首次通過反相HPLC對(duì)16個(gè)批次仙鶴草中7種有效成份進(jìn)行定量分析。同時(shí)結(jié)合仙鶴草的指紋圖譜對(duì)不同