鉤藤總生物堿的抗抑郁作用及其血清藥物化學(xué)初步研究.pdf

1、抑郁癥是一種以心境低落為主要特征的精神障礙性疾病，現(xiàn)逐漸成為嚴(yán)重危害人們健康的重大公共衛(wèi)生問(wèn)題。目前，臨床上用于治療該疾病的藥物多以西藥為主，但西藥治療存在停藥后易復(fù)發(fā)及毒副作用大等問(wèn)題，極大地影響了臨床療效。中醫(yī)藥具有療效穩(wěn)定、作用持久、不良反應(yīng)小的特點(diǎn)，在抑郁癥的防治方面具有悠久的歷史，現(xiàn)愈來(lái)愈成為國(guó)內(nèi)外研究的熱點(diǎn)。鉤藤(Uncaria rhynchophylla.(Miq.) Miq. exHvail.)為藥典鉤藤中的主要品種，為

2、傳統(tǒng)中藥，具有鎮(zhèn)靜、抗驚厥、抗焦慮、神經(jīng)保護(hù)及抗阿爾茨海默病等作用。近年來(lái)有研究顯示大葉鉤藤（Uncaria macrophylla Wall.）生物堿、臺(tái)灣鉤藤（Uncaria lanosa Wallich var. appendiculata Ridsd）乙醇提取物（主要成分為鉤藤堿）及異鉤藤堿具有明顯的抗抑郁作用，但鉤藤(Uncaria rhynchophylla.(Miq.) Miq. exHvail.)在抗抑郁方面的研究鮮有報(bào)

3、道。吲哚生物堿是鉤藤的主要有效成分，根據(jù)其C-2是否被氧化可分為氧化型吲哚生物堿和非氧化型吲哚生物堿。實(shí)驗(yàn)室前期研究顯示：來(lái)自不同產(chǎn)地的鉤藤(Uncaria rhynchophylla.(Miq.) Miq. exHvail.)藥材可分為主要含氧化吲哚生物堿的鉤藤（S1）和主要含非氧化吲哚生物堿的鉤藤（S2）兩大類別。因此本課題在前期實(shí)驗(yàn)及鉤藤?gòu)V泛的神經(jīng)藥理活性基礎(chǔ)上，探索鉤藤(Uncaria rhynchophylla.(Miq.)

4、Miq. exHvail.)總生物堿的抗抑郁活性，以期為鉤藤干預(yù)、緩解抑郁癥狀提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)，同時(shí)也進(jìn)一步觀察和比較主成分不同的S1和S2這兩類鉤藤的藥理作用是否具有明顯的差異。
　　目的：研究鉤藤(Uncaria rhynchophylla.(Miq.) Miq. exHvail.)總生物堿的抗抑郁作用及可能的作用機(jī)制；對(duì)S1、S2鉤藤生物堿提取物的入血成分進(jìn)行鑒定與表征，探討其藥效物質(zhì)基礎(chǔ)。
　　方法：⑴將小鼠束縛在特制的

5、離心管內(nèi)，每天8 h、連續(xù)10 d，制作小鼠抑郁模型，并灌胃給予不同劑量的S1、S2鉤藤總生物堿(80、40、20 mg/kg)和氟西汀(Fluoxetine, FLU10 mg/kg)治療。以自主活動(dòng)實(shí)驗(yàn)、強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)和糖水偏好實(shí)驗(yàn)評(píng)價(jià)各組小鼠抑郁行為，用 ELISA法測(cè)定小鼠血清皮質(zhì)酮(CORT)、腫瘤壞死因子(TNF-α)和 NO的含量；建立測(cè)定小鼠腦內(nèi)單胺類神經(jīng)遞質(zhì)去甲腎上腺素（NE）、腎上腺素（E）、酪氨酸（Tyr）、多巴胺（

6、DA）、5-羥吲哚乙酸（5-HIAA）、5-羥色胺（5-HT）和色氨酸（Trp）的高效液相色譜-熒光分析方法并測(cè)定小鼠腦內(nèi)單胺類神經(jīng)遞質(zhì)的含量。⑵應(yīng)用UFLC-MS-IT-TOF技術(shù)分析比較 S1、S2鉤藤生物堿提取物、含藥血清和空白血清的成分的差異，確定S1、S2鉤藤生物堿提取物大鼠灌胃后血中移行成分。
　　結(jié)果：①與空白對(duì)照組相比，連續(xù)10 d慢性束縛應(yīng)激后模型組小鼠自主活動(dòng)能力明顯減弱，體質(zhì)量明顯降低，小鼠強(qiáng)迫游泳不動(dòng)時(shí)間明

7、顯延長(zhǎng),糖水偏愛率明顯降低（P＜0.01），顯示出抑郁癥狀，且小鼠血清中 CORT、TNF-α和 NO水平明顯升高（P＜0.01），腦內(nèi)單胺類神經(jīng)遞質(zhì)NE、E、Tyr、DA、5-HIAA、5-HT和Trp含量顯著降低（P＜0.01）；與模型組相比，S1、S2鉤藤總生物堿均能顯著增加小鼠體質(zhì)量，縮短抑郁模型小鼠強(qiáng)迫游泳不動(dòng)時(shí)間及提高小鼠糖水偏好值（P＜0.05），改善小鼠抑郁行為，而且，S1、S2鉤藤總生物堿均能顯著降低抑郁小鼠血清COR

8、T、TNF-α和NO水平， S1鉤藤總生物堿各劑量組能顯著增加5-HIAA、5-HT和Trp的含量（P＜0.05），但對(duì)NE、E、Tyr和DA的含量無(wú)顯著影響（P﹥0.05），而S2鉤藤總生物堿各劑量組能顯著增加小鼠腦內(nèi)NE、E、Tyr、DA和5-HIAA、5-HT、Trp的含量（P＜0.05）。②通過(guò)對(duì)比樣品的色譜圖、分子離子、產(chǎn)物離子和色譜保留時(shí)間并參考相關(guān)文獻(xiàn)，在S1鉤藤生物堿提取物中發(fā)現(xiàn)了26個(gè)血中移行成分包含7個(gè)原型成分(去氫

9、鉤藤堿、異去氫鉤藤堿、鉤藤堿、異鉤藤堿、18，19-dehydrocorynoxinic acid、18，19-dehydrocorynoxinic acid B、和Isorhynchophyllic acid)和19個(gè)代謝物；在S2鉤藤生物堿提取物中發(fā)現(xiàn)了23個(gè)血中移行成分包含7個(gè)原型成分(縫仔嗪甲醚、去氫毛鉤藤堿、毛鉤藤堿、去氫鉤藤堿、異去氫鉤藤堿、鉤藤堿和異鉤藤堿)和16個(gè)代謝物其中有5個(gè)代謝物結(jié)構(gòu)未確定。
　　結(jié)論：⑴鉤藤

10、(Uncaria rhynchophylla.(Miq.) Miq. exHvail.)總生物堿具有明顯的抗抑郁作用，其機(jī)制可能與調(diào)節(jié)下丘腦－垂體－腎上腺(HPA)軸功能，減少血清中TNF-α和NO含量以及增加腦內(nèi)單胺類神經(jīng)遞質(zhì)含量有關(guān)。但這兩種類型鉤藤生物堿對(duì)作用于小鼠腦組織神經(jīng)遞質(zhì)的靶點(diǎn)有一定的偏向性，以氧化吲哚生物堿為主的S1鉤藤總生物堿主要是通過(guò)增加小鼠腦組織5-HIAA、5-HT和Trp的含量發(fā)揮抗抑郁作用，對(duì)NE、E、Tyr

11、和DA的改變影響不顯著，而以非氧化吲哚生物堿為主的S2鉤藤總生物堿主要是通過(guò)提高小鼠腦內(nèi)NE、E、Tyr、DA和5-HIAA、5-HT、Trp的含量發(fā)揮抗抑郁作用。⑵S1、S2兩類鉤藤生物堿提取物的血清藥物化學(xué)研究表明其氧化吲哚類生物堿主要以水解，氧化，葡萄糖醛酸化，羥基化，甲基化和水加合等為代謝途徑而非氧化吲哚類生物堿則主要以脫甲基，脫氫和水加合為代謝途徑，并且其血中移行成分很可能是其體內(nèi)發(fā)揮藥效的直接作用物質(zhì)，為明確鉤藤生物堿提取物