兩種天然產物的生物活性研究.pdf

1、通過對課題組近年來分離得到的化合物進行活性篩選，發(fā)現(xiàn)高圣草素具有良好的細胞氧化損傷保護作用;澤瀉醇B-23-乙酸酯具有顯著地肺癌細胞增殖抑制活性，對這兩種天然產物展開了較為深入的活性研究。
　　氧化應激是導致血管內皮細胞損傷進而引發(fā)多種血管疾病，如動脈粥樣硬化、慢性腎病等的主要因素。氧化應激的產生是由于細胞內抗氧化防御系統(tǒng)和氧化因素—如活性氧(ROS)之間的失衡所致。應對氧化應激引起的氧化損傷的有效方法之一是啟動細胞內源性抗氧化系

2、統(tǒng)。核因子E2相關因子2/抗氧化反應元件(Nrf2/ARE)信號通路是機體應對氧化應激的第一道防線，激活該信號通路可以幫助細胞重建內源性抗氧化系統(tǒng)，維持穩(wěn)定的氧化還原平衡。Nrf2是細胞維持內源性氧化還原平衡的主要轉錄因子。氧化應激條件下，Nrf2進入細胞核與其靶基因啟動端抗氧化反應元件（antioxidant response element, ARE）結合，啟動Ⅱ相解毒酶和抗氧化酶的表達，從而提高細胞抗氧化損傷能力，為細胞提供深層次

3、、長久地保護作用。有研究表明，激活Nrf2/ARE信號通路可以有效的預防或改善氧化因素導致的多種血管疾病。發(fā)現(xiàn)Nrf2激動劑，通過啟動Nrf2/ARE信號通路以提高血管內皮細胞的抗氧化損傷能力，預防氧化應激引起的內皮細胞損傷或功能異常，有望成為防治心腦血管疾病的有效方法。
　　高圣草素是課題組從槲寄生中分離得到的一種二氫黃酮類化合物。高圣草素是一種抗氧化劑，具有體外自由基清除活性。本論文研究了高圣草素對過氧化氫(H2O2)引起的人

4、臍靜脈內皮EA.hy926細胞氧化損傷的保護作用及對Nrf2信號通路的激動作用。
　　MTT和細胞實時生長檢測(RTCA)結果表明，高圣草素對H2O2引起的EA.hy926細胞增殖抑制表現(xiàn)出劑量依賴性保護作用。DAPI染色和AnnexinⅤ/PI雙染結果表明，高圣草素可以抵抗H2O2引起的EA.hy926細胞凋亡。免疫熒光、Western blot、real time RT-PCR、蛋白半衰期檢測等結果表明，高圣草素能夠誘導Nrf

5、2進入細胞核、誘導Nrf2、NQO1和γGCS蛋白水平和mRNA水平提高、延長Nrf2蛋白的半衰期。進一步研究表明，高圣草素能夠增加細胞內還原型谷胱甘肽的含量、降低H2O2導致的胞內ROS聚集、調節(jié)凋亡相關蛋白的表達水平。通過Nrf2小分子干擾RNA(Nrf2-siRNA)沉默EA.hy926細胞中Nrf2基因表達，MTT、RTCA、Western blot等方法檢測，結果表明高圣草素保護作用消失，提示高圣草素的抗氧化損傷作用是通過調節(jié)

6、Nrf2信號通路。綜上所述，高圣草素是一種天然的Nrf2激動劑，可以通過激活Nrf2/ARE信號通路保護EA.hy926細胞抵制H2O2引起的線粒體介導的凋亡。
　　惡性腫瘤成為當今世界威脅人類健康、導致死亡的首要原因之一。其中肺癌因發(fā)病率和死亡率高而備受關注。隨著全球肺癌的發(fā)病率和死亡率地逐年增加，急需開發(fā)有效的化療藥物來延長肺癌患者的生命周期。
　　澤瀉醇B-23-乙酸酯是課題組從建澤瀉中分離得到的四環(huán)三萜類化合物。采用

7、MTT法檢測了四個結構類似的四環(huán)三萜化合物，澤瀉醇A(A1)、澤瀉醇A-23-乙酸酯(A2)、澤瀉醇O(A3)和澤瀉醇B-23-乙酸酯(A4)對兩種肺癌細胞增殖活性的影響。結果表明澤瀉醇A(A1)和澤瀉醇B-23-乙酸酯(A4)對A549和NCI-H292兩種肺癌細胞株表現(xiàn)出較明顯的增殖抑制活性。選擇了獲得量大、活性更好的澤瀉醇B-23-乙酸酯為目標化合物，開展了進一步研究。DAPI染色和AnnexinⅤ/PI雙染結果表明A4能夠誘導肺

8、癌細胞凋亡。進一步研究發(fā)現(xiàn)，化合物A4可誘導細胞內ROS聚集、降低線粒體膜電位。此外，A4能夠誘導NCI-H292細胞S期阻滯，而對A549細胞周期無明顯影響。采用Western b lot、免疫熒光等方法檢測發(fā)現(xiàn)，A4能夠促進促凋亡蛋白Bax表達、抑制抗凋亡蛋白Bcl-2和Bcl-XL表達、促使細胞色素c從線粒體釋放，進而激活caspase-9、caspase-3和PARP等的級聯(lián)反應，最終導致肺癌細胞的凋亡。A4還可促使凋亡誘導因子