白藜蘆醇聯(lián)用紫杉醇對人食管鱗癌EC109細胞的影響.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、目的:
  研究在人食管鱗癌 EC109細胞株中白藜蘆醇對紫杉醇抗腫瘤作用的影響并探討其機制,為臨床指導食管癌患者合理用藥提供相關的用藥依據。
  方法:
  實驗分為四組,即陰性對照組、紫杉醇單用組、白藜蘆醇單用組和兩藥聯(lián)用組。
  1.采用MTT法檢測白藜蘆醇聯(lián)合紫杉醇對細胞存活率的影響,同時顯微鏡下觀察細胞形態(tài)學的變化;
  2.采用克隆形成實驗檢測藥物處理后,各組細胞增殖能力的差異;
  3.

2、 Hoechst33258染色法檢測藥物處理后,各組細胞凋亡情況;
  4.采用流式細胞術分析藥物處理后,細胞周期分布以及凋亡率;
  5.采用Western blot法考察藥物處理后,白藜蘆醇影響紫杉醇抗腫瘤作用的機制;
  6.通過HPLC法檢測細胞內紫杉醇的含量;
  7.通過Rh123排出實驗檢測聯(lián)合用藥后對細胞外排功能的影響;
  8.采用裸鼠移植瘤模型研究白藜蘆醇對紫杉醇體內抗腫瘤活性的影響。<

3、br>  結果:
  1.紫杉醇和白藜蘆醇分別作用于EC109細胞48 h后,紫杉醇和白藜蘆醇對細胞增殖均有一定的抑制作用,并且隨濃度的增加,它們對細胞增殖的抑制率也逐漸增加。當一系列濃度的紫杉醇與一系列濃度的白藜蘆醇聯(lián)合作用,細胞生存率明顯高于紫杉醇單用組。MTT實驗的測定結果顯示,白藜蘆醇減弱了紫杉醇的抑制細胞增殖的作用。
  2.克隆形成實驗表明,單用紫杉醇作用于 EC109細胞幾乎無克隆形成,當紫杉醇和白藜蘆醇聯(lián)用后

4、,EC109細胞克隆形成能力明顯增強。
  3. Hoechst33258染色后,熒光顯微鏡下觀察:紫杉醇作用24 h后,EC109細胞出現凋亡小體,呈現典型的細胞凋亡形態(tài)。同時加入白藜蘆醇后可見凋亡小體、核裂解數量減少。
  4.流式細胞術分析細胞凋亡的結果顯示,紫杉醇和白藜蘆醇單用可誘導部分細胞凋亡,凋亡率分別為(39.8±6.95)%和(14.1±3.11)%。兩藥聯(lián)用后,與紫杉醇單用相比,凋亡率明顯下降,凋亡率為(2

5、2.0±4.89)%。流式細胞術分析細胞周期結果顯示,單用紫杉醇和白藜蘆醇分別可不同程度地誘導細胞產生G2/M期和S期阻滯。兩藥聯(lián)用后,與單用紫杉醇相比,G2/M期比例下降,說明白藜蘆醇降低了紫杉醇對G2/M期的細胞周期阻滯作用。
  5. Western blot實驗檢測了EC109細胞中相關蛋白的表達情況,如P-gp、P53、caspase-3、caspase-9、Procaspase-3、Procaspase-9、Bcl-2

6、和Bax等。紫杉醇聯(lián)用白藜蘆醇之后,跨膜轉運蛋白P-gp在聯(lián)合用藥時較紫杉醇單用組表達量升高了,P53蛋白的表達量較紫杉醇單用組明顯降低,Bcl-2/Bax的比率升高,caspase-9通過自剪接激活減少,引起細胞凋亡的執(zhí)行者caspase-3的表達量也減少了。
  6. HPLC法檢測細胞內紫杉醇的含量發(fā)現兩藥聯(lián)合作用組較紫杉醇單用組紫杉醇在細胞內的積累量減少了。
  7. Rhl23蓄積實驗中經流式細胞儀檢測合用組的平均

7、熒光強度明顯低于紫杉醇單用組,因此,紫杉醇與白藜蘆醇聯(lián)合應用較紫杉醇單獨用藥細胞的外排功能增強了。
  8.體內實驗表明,在裸鼠體內,白藜蘆醇減弱了紫杉醇的抗腫瘤作用。
  結論:
  在人食管鱗癌細胞株 EC109中,白藜蘆醇減弱了紫杉醇抑制細胞增殖的作用,其機制可能與紫杉醇聯(lián)用白藜蘆醇之后,通過上調跨膜轉運糖蛋白P-gp的表達,使紫杉醇的外排增加,細胞內紫杉醇的濃度降低,從而導致細胞凋亡減少。同時還介導了細胞凋亡的

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