高鹽攝 入加速誘導的高血壓性左室重塑及心臟淋巴管變化的實驗研究.pdf

1、目的：高鹽攝入是高血壓靶器官損傷發(fā)生發(fā)展的重要因素之一。高鹽攝入不僅能夠引起血壓水平的增高，還可獨立于血壓水平直接引起心臟等靶器官損傷。我們在前期工作中證實，經飲食攝入8.0％NaCl能夠加速自發(fā)性高血壓大鼠(Soontaneously Hypertensive Rats，SHR)左心室結構和功能異常的出現，且左心室由代償性肥厚演變至失代償性肥厚的關鍵時間窗為高鹽負荷后8～12周。因此，本研究繼續(xù)利用前期工作的組織樣本，進一步檢測在此過

2、程中心臟出現的病理學變化，重點為氧化應激反應，心肌細胞DNA損傷與凋亡，巨噬細胞浸潤和TonEBP/VEGF-C介導的淋巴管增生反應。
　　 方法：7周齡SHR及京都Wistar大鼠(Wistar Kyoto Rats，WKY)，經適應性喂養(yǎng)1周后，隨機分為正常飲食組(0.5％NaCl)、中鹽飲食組(4.0％NaCl)高鹽飲食組(8.0％NaCl)三個亞組。所有大鼠于20周齡末行有創(chuàng)血流動力學檢測。檢測結束后，處死大鼠摘取心臟，

3、在液氮中速凍后保存于-80℃冰箱。組織勻漿，采用ELISA法檢測組織丙二醛(MDA)含量，以評價組織氧化應激水平。常規(guī)石蠟包埋、切片，采用8-OHdG和TUNEL染色評價心肌細胞DNA損傷和心肌細胞凋亡情況；采用podoplanin、LYVE-1染色評價心肌淋巴管分布和形態(tài)學改變；采用CD68染色評價巨噬細胞浸潤程度。采用TRIzol法提取大鼠心臟組織總RNA，使用逆轉錄PCR法合成總RNA樣本的cDNA第一鏈，使用熒光定量PCR法對大

4、鼠心室組織LYVE-1、podoplanin、Prox-1、TonEBP、VEGF-C的mRNA表達進行相對定量。
　　 結果：
　　 1)WKY各亞組dP/dtmax(反映LV收縮功能的指標)、dP/dtmin(反應主動舒張功能的指標)以及LVEDP(反應被動舒張功能的指標)組間比較無明顯差異；與SHR低鹽組相比，SHR中鹽組dP/dtmax顯著增加，表明SHR中鹽組呈左心室高動力循環(huán)狀態(tài)；與SHR中鹽組相比，SHR高

5、鹽組LVEDP明顯增加，且dP/dtmax和dP/dtmin明顯降低，表明8.0％NaCl干預12周引起SHR左室功能嚴重受損。
　　 2)隨著食鹽含量增加，WKY和SHR各亞組大鼠心肌MDA含量、8-OHdG陽性細胞比率隨之增加；WKY各亞組TUNEL陽性細胞比率無明顯差異，隨著食鹽含量增加，SHR各亞組大鼠TUNEL陽性細胞比率隨之增加；且SHR高鹽組氧化應激水平、心肌細胞DNA損傷程度和凋亡細胞數目明顯高于SHR中鹽組。表

6、明8.0％NaCl干預12周引起的高血壓左心室重塑伴隨氧化應激、心肌細胞DNA損傷和心肌細胞凋亡。
　　 3)與SHR低鹽組和中鹽組相比，SHR高鹽組心肌淋巴管(podoplanin和LYVE-1)密度顯著增加、管腔面積增大且巨噬細胞(CD68)數量顯著增加，表明高鹽組出現心肌淋巴管增生和淋巴管擴張。與SHR低鹽組和中鹽組相比，SHR高鹽組LYVE-1、podoplanin、Prox-1、TonEBP和VEGF-C mRNA表達