硫化氫通過上調SIRT1拮抗同型半胱氨酸誘導HT22細胞衰老.pdf

1、目的：探討硫化氫（Hydrogen sulfide,H2S）是否可以通過上調SIRT1拮抗同型半胱氨酸誘導HT22細胞衰老。
　　方法：Cell counting Kit-8(CCK8)法檢測細胞的活性；β-半乳糖苷酶染色法(Senescence Associated acidic-β-Galactosidase SA-β-Gal)、臺盼藍計數(shù)求細胞生長曲線及Western Blotting檢測細胞衰老相關蛋白P16INK4a、P

2、21CIPL蛋白的表達評價HT22細胞衰老；Western Blotting檢測沉默信息調節(jié)因子1(Silent mating type information regulation homolog1,SIRT1)蛋白的表達；羅丹明123(Rh123)染色熒光顯微鏡照相檢測細胞線粒體膜電位；Annexin V/PI染色流式細胞儀和Hoechst33258染色檢測細胞凋亡。
　　結果：1.Hcy(2.5、5、10 mmol/L)處理

3、HT22細胞48h后，SA-β-Gal陽性細胞明顯增加，衰老負性調控蛋白 P16INK4a、P21CIPL蛋白表達明顯上調，細胞生長曲線明顯呈下降趨勢，表明 Hcy能誘導HT22細胞衰老。2. NaHS(H2S供體，100、200、400μmol/L)可呈濃度依賴性地抑制Hcy(5mmol/L,48 h)誘導HT22細胞SA-β-Gal染色陽性細胞增加，P16INK4a、P21CIPL蛋白表達上調及細胞生長曲線下降趨勢，表明H2S可拮抗

4、Hcy誘導HT22細胞衰老。3. Hcy(2.5、5、10 mmol/L)處理 HT22細胞48小時后，細胞 SIRT1蛋白的表達呈濃度依賴性下調，表明 Hcy可抑制HT22細胞 SIRT1蛋白的表達。4. NaHS (100、200、400μmol/L,48h)可濃度依賴性地上調 HT22細胞 SIRT1蛋白的表達，而且可逆轉Hcy(5 mmol/L)處理HT22細胞后SIRT1蛋白表達的下調作用，表明 H2S可上調 HT2

5、2細胞 SIRT1的表達。5. SIRT1抑制劑Sirtinol(15μmol/L)可逆轉NaHS(400μmol/L)對Hcy(5mmol/L,48 h)增加HT22細胞中SA-β-Gal染色陽性細胞比例、上調衰老相關關鍵蛋白P16INK4a、P21CIPL蛋白表達以及促進細胞生長曲線下降趨勢的阻斷作用，表明SIRT1對H2S抑制Hcy誘導HT22細胞衰老具有介導作用。
　　結論:H2S通過上調SIRT1拮抗Hcy誘導HT22細