甘藍(lán)型油菜顯性核不育雄配子發(fā)育相關(guān)基因Bnrad23的克隆及初步分析.pdf

1、分類號(hào):密級(jí)華中農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文甘藍(lán)型油菜顯性核不育雄配子發(fā)育相關(guān)基因Bnra心了的克隆及初步分析CloingandAnalysisofBnradZ了GenesinthedeveloPmentofMaleGametogenesisinDominantGenicMaleSterilityBrassicanaPusL研究生:李勇指導(dǎo)教師:楊光圣教授專業(yè):作物生物技術(shù)研究方向:油菜分子生物學(xué)學(xué)位名稱:農(nóng)學(xué)碩士獲得學(xué)位時(shí)間:華中農(nóng)業(yè)大學(xué)植物

2、科學(xué)技術(shù)學(xué)院二00八年五月華中農(nóng)業(yè)大學(xué)2008屆碩士學(xué)位論文2.2.3.2RACE產(chǎn)物的純化.....................................................……，...............……192.2.3.3RACE產(chǎn)物的克隆測(cè)序...................................................................……192.2.3.4RAC

3、E技術(shù)所獲。DNA序列的生物信息學(xué)分析..........................……202.2.4基因組DNA序列的克隆..........................................................................……202.2.4.1引物設(shè)計(jì)..................................................................

4、.........................……202.2.4.2基因組DNA提取..............................................................................……202.2.4.3基因組擴(kuò)增..................................................................................

5、.....……202.2.4.4基因組DNA序列分析....................................................................……212.3半定量RpPCR...............................................................................................……212.3.1Rs1O46A

6、B和9012AB的RNA提取.............................................……，.……212.3.2引物設(shè)計(jì)..................................................................................................……212.3.3循環(huán)數(shù)確定................................

7、..............................................................……212.3.4半定量PCR檢測(cè)....................................................................................……212.4BnradZ了基因啟動(dòng)子的分離測(cè)序.................................

8、............……，..............……222.4.1合成寡核普酸制作接頭..........................................................................……222.4.2BnradZ了基因啟動(dòng)子的分離及序列測(cè)定…，................……‘.‘.…，，............……232.4.2.1限制性內(nèi)切酶消化基因組DNA.....

9、............................……，...............……232.4.2.2純化DNA片段..................................................................................……232.4.2.3接頭與純化后酶切產(chǎn)物的連接..................................................

10、.......……232.4.2.4巢式PCR擴(kuò)增……，............................................................................……243結(jié)果與分析..........................................................................................................

11、..……253.1總RNA質(zhì)量檢測(cè)和濃度測(cè)定.......................................................................……253.2BnradZ了基因全長(zhǎng)cDNA克隆及序列分析....................................................……253.2.13’RACE擴(kuò)增Bnrad23基因3’端側(cè)翼序列.............

12、.............................……253.2.25’RACE擴(kuò)增BnradZ了基因5’端側(cè)翼序列....................……，...............……263.2.3Bnrad23基因組全長(zhǎng)擴(kuò)增結(jié)果，..............................................................……273.2.4序列結(jié)構(gòu)分析.................

13、.........................................................................……283.2.4.1Bnrad23基因全長(zhǎng)cDNA序列閱讀框分析...................................……283.2.4.2Bnra心3基因編碼蛋白分析......................................................

14、......……293.3BnradZ了基因組DNA序列分析..............................................……，...............……犯3.3.1基因組預(yù)測(cè)..............……，..................……，..........................……，...............……犯3.3.2Bnrad23基因在Rs1O46AB中的序列比

15、對(duì).....................……，...............……323.4Bnrad23基因啟動(dòng)子的分離....................................................……，...............……333.5BnradZ了基因編碼區(qū)在9012AB中的擴(kuò)增...................................................……343.6