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文檔簡介
1、腦多頭蚴病又稱腦包蟲病,是多頭帶絳蟲(Taenia multiceps)的中絳期幼蟲(腦多頭蚴Coenurusce cerebralis)寄生于羊和其他有蹄類動物的的腦、脊髓內(nèi),引起中樞神經(jīng)系統(tǒng)的功能障礙的一種人畜共患寄生蟲病。該病呈世界性分布,尤其以牧區(qū)較為常見。腦包蟲病的藥物療法效果不穩(wěn)定;手術療法效果雖好,但僅適用于腦表層的包囊。隨著人們對食品安全的關注和寄生蟲耐藥性的出現(xiàn),免疫接種重新受到人們的重視。早期進行疫苗研究的抗原均為天
2、然抗原,雖然對腦包蟲的免疫預防有一定的效果;但是由于受抗原來源的限制,使其很難推廣應用。在這種情況下,基因工程疫苗成為一個不錯的選擇。
本研究根據(jù)已知的帶科絳蟲的18kDa抗原基因的序列設計一對特異性引物,對多頭帶絳蟲六鉤蚴總RNA進行RT-PCR擴增,得到約552bp的目的片段?;厥漳康钠尾⒖寺〉絇MD18-T載體上,序列測定結果顯示本次實驗首次擴增出了中國株多頭帶絳蟲的18kDa抗原基因,命名為Tm18。擴增的序列中
3、包含完整的開放閱讀框,編碼由131個氨基酸組成的蛋白質(zhì)。軟件分析表明多頭帶絳蟲四川株Tm18與國外報道的多頭帶絳蟲土耳其株(序列號為EF672034)同源性為91.26%,氨基酸序列同源性為79.39%。
根據(jù)獲得的基因序列設計一對表達引物,構建原核表達質(zhì)粒,轉(zhuǎn)化表達宿主菌BL21(DE3)進行原核表達,同時對表達條件進行優(yōu)化,確立了pGEX-4T-rTm18表達的最佳條件為37℃、0.6mmol/LIPTG誘導8h,融合
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