多頭帶絳蟲Tm18基因的克隆與原核表達.pdf

1、腦多頭蚴病又稱腦包蟲病，是多頭帶絳蟲（Taenia multiceps）的中絳期幼蟲(腦多頭蚴Coenurusce cerebralis)寄生于羊和其他有蹄類動物的的腦、脊髓內(nèi)，引起中樞神經(jīng)系統(tǒng)的功能障礙的一種人畜共患寄生蟲病。該病呈世界性分布，尤其以牧區(qū)較為常見。腦包蟲病的藥物療法效果不穩(wěn)定；手術療法效果雖好，但僅適用于腦表層的包囊。隨著人們對食品安全的關注和寄生蟲耐藥性的出現(xiàn)，免疫接種重新受到人們的重視。早期進行疫苗研究的抗原均為天

2、然抗原，雖然對腦包蟲的免疫預防有一定的效果；但是由于受抗原來源的限制，使其很難推廣應用。在這種情況下，基因工程疫苗成為一個不錯的選擇。
　　 本研究根據(jù)已知的帶科絳蟲的18kDa抗原基因的序列設計一對特異性引物，對多頭帶絳蟲六鉤蚴總RNA進行RT-PCR擴增，得到約552bp的目的片段?；厥漳康钠尾⒖寺〉絇MD18-T載體上，序列測定結果顯示本次實驗首次擴增出了中國株多頭帶絳蟲的18kDa抗原基因，命名為Tm18。擴增的序列中

3、包含完整的開放閱讀框，編碼由131個氨基酸組成的蛋白質(zhì)。軟件分析表明多頭帶絳蟲四川株Tm18與國外報道的多頭帶絳蟲土耳其株（序列號為EF672034）同源性為91.26％，氨基酸序列同源性為79.39％。
　　 根據(jù)獲得的基因序列設計一對表達引物，構建原核表達質(zhì)粒，轉(zhuǎn)化表達宿主菌BL21(DE3)進行原核表達，同時對表達條件進行優(yōu)化，確立了pGEX-4T-rTm18表達的最佳條件為37℃、0.6mmol/LIPTG誘導8h，融合