美洲鰣魚(yú)GnRH基因的克隆與表達(dá)分析.pdf

1、美洲鰣魚(yú)(Alosa sapidissima)隸屬于鯡形總目(Clupeomorpha),鯡形目(Clupeiformes),鯡科(Clupeidae)、西鯡屬(Alosa)。美洲鰣魚(yú)與中國(guó)的鰣魚(yú)(Tenualosa reevesii Richardson)不但外形相似，且在生活習(xí)性上都很近似，二者均是具有很高營(yíng)養(yǎng)價(jià)值和經(jīng)濟(jì)價(jià)值的洄游性魚(yú)類(lèi)。目前，在市場(chǎng)上美洲鰣魚(yú)可以作為在中國(guó)資源奇缺的中國(guó)鰣魚(yú)的替代品種進(jìn)行養(yǎng)殖、推廣和食用。促性腺激素

2、釋放激素（GnRH）一種具有高度保守性的十肽類(lèi)激素，作為脊椎動(dòng)物神經(jīng)內(nèi)分泌系統(tǒng)中關(guān)鍵激素，其在腦-垂體-性腺（BPG）軸中起到重要的調(diào)控作用。
　　本文通過(guò)同源克隆與RACE(Rapid amplification of cDNA ends)技術(shù)獲得了美洲鰣魚(yú)3種GnRH全長(zhǎng)cDNA，通過(guò)生物軟件進(jìn)行了分析，并利用實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)對(duì)這些基因在不同組織及繁殖時(shí)期表達(dá)進(jìn)行了研究:
　　（1）美洲鰣魚(yú)GnRH1的cDNA序列

3、全長(zhǎng)為462bp，包括一個(gè)長(zhǎng)258bp的開(kāi)放閱讀框(ORF)，一個(gè)150bp的5’非編碼區(qū)，一個(gè)61bp的3’非編碼區(qū)，一個(gè)終止密碼子(TGA)，共編碼86個(gè)氨基酸，其中信號(hào)肽長(zhǎng)為22個(gè)氨基酸，預(yù)測(cè)的蛋白分子量為9.52kD，等電點(diǎn)為6.80。
　?。?）美洲鰣魚(yú)GnRH2的cDNA序列全長(zhǎng)為809bp，包括一個(gè)長(zhǎng)255bp的開(kāi)放閱讀框(ORF)，一個(gè)224bp的5’非編碼區(qū)，一個(gè)327bp的3’非編碼區(qū)，一個(gè)終止密碼子(TGA)

4、，共編碼85個(gè)氨基酸，其中信號(hào)肽長(zhǎng)為24個(gè)氨基酸，預(yù)測(cè)的蛋白分子量為9.82kD，等電點(diǎn)為8.66。
　?。?）美洲鰣魚(yú)GnRH3的cDNA序列全長(zhǎng)為887bp，包括一個(gè)長(zhǎng)315bp的開(kāi)放閱讀框(ORF)，一個(gè)111bp的5’非編碼區(qū)，一個(gè)458bp的3’非編碼區(qū)，一個(gè)終止密碼子(TGA)，共編碼105個(gè)氨基酸，其中信號(hào)肽長(zhǎng)為21個(gè)氨基酸，預(yù)測(cè)的蛋白分子量為12.29kD，等電點(diǎn)為8.18。
　　每一種GnRH都包括一個(gè)信號(hào)

5、肽、一個(gè)Gly-Lys-Arg連接序列和一個(gè)GnRH相關(guān)肽。分析比較了美洲鰣魚(yú)3種GnRH基因的氨基酸序列與其它脊椎動(dòng)物的同源性。系統(tǒng)進(jìn)化分析表明美洲鰣魚(yú)3種不同分子形式的GnRH分別歸屬于3個(gè)不同分支：cGnRH-II分支、sGnRH分支和魚(yú)類(lèi)特異性GnRH分支(如sbGnRH,cfGnRH等)。
　　美洲鰣魚(yú)GnRH基因在腦中表達(dá)量最高且具有性別特異性表達(dá)模式，其中雌性腦中的GnRH mRNA表達(dá)水平高于雄性。在周期表達(dá)的研究