γ-氨基丁酸對腸干細胞增殖分化的調(diào)節(jié)及在腸損傷中的保護作用的探究.pdf

1、目的:癌癥研究已經(jīng)在預防、早期診斷以及尋找惡性腫瘤特定的分子標記上獲得了突出的成果。然而，如何防止因為使用化療手段治療晚期腫瘤轉移所引起的正常組織受損仍然有著很大的挑戰(zhàn)。γ氨基丁酸可以抑制神經(jīng)干細胞增殖，而本研究發(fā)現(xiàn)腸上皮表達γ氨基丁酸能信號系統(tǒng)，并且γ氨基丁酸參與調(diào)節(jié)腸上皮干細胞的增殖與分化。于是，我們嘗試檢測是否通過藥物干預γ氨基丁酸能信號系統(tǒng)可以促進腸干細胞增殖來加速腸上皮的由于化療導致的損傷修復。
　　方法:利用免疫組織化

2、學技術確認γ氨基丁酸A型及B型受體亞基、合成酶、轉運體和降解酶在小鼠及人腸上皮的表達分布;給予成年C57小鼠γ氨基丁酸A型受體激動劑muscimol、拮抗劑bicuculline、B型受體激動劑baclofen及拮抗劑CGP54626腹腔注射2周，取空腸組織做HE染色觀察腸形態(tài)，免疫組化染色分析比較暫時性增殖細胞數(shù)目、BrdU+細胞數(shù)目、杯狀細胞數(shù)目及凋亡細胞數(shù)目;給予成年C57小鼠連續(xù)5天治療劑量或單次大劑量5氟尿嘧啶腹腔注射建立腸損

3、傷模型，同時注射bicuculline或者CGP54626，取空腸組織做HE染色觀察腸形態(tài)，免疫組化染色分析比較暫時性增殖細胞數(shù)目、BrdU+細胞數(shù)目、杯狀細胞數(shù)目、凋亡細胞數(shù)目及γH2AX+細胞;利用免疫組化染色β-catenin探究Wnt信號通路，使用QPCR技術檢測常備干細胞標志物lgr5、olfm4與儲備干細胞標志物mTert、bmi mRNA相對表達量以及DNA損傷相關基因的mRNA相對表達量。
　　結果:1.GAD65

4、、GAD67、GAT3、GABAARα1、β1/2/3、GABABR1、GABABR2在腸上皮都有表達，且在隱窩表達較多，此外GABAARπ、α5、δ、γ2、GAT2均在腸上皮表達，而ABAT幾乎不在腸上皮表達。2.腹腔注射muscimol減少了絨毛長度、暫時性增殖細胞、杯狀細胞的數(shù)目，增加了凋亡細胞的數(shù)目;bicuculline增加了絨毛長度、杯狀細胞、潘氏細胞數(shù)目;baclofen減少了暫時性增殖細胞數(shù)目而CGP54626則增加了暫

5、時性增殖細胞數(shù)目。3.在化療藥物誘導的腸損傷模型中腹腔注射bicuculline或CGP54626相較生理鹽水減少了絨毛受損，增加了暫時性增殖細胞數(shù)目，減少了γH2AX+細胞的數(shù)目，olfm4、lgr5的mRNA相對表達量較高，而bmi1、mTert的mRNA相對表達量較低，注射CGP54646同時減少了干細胞的凋亡細胞數(shù)目，且gtf2h2與prkdc的mRNA表達量下降。
　　結論:1.γ氨基丁酸能信號系統(tǒng)存在于腸道上皮。2.γ