楊梅葉原花色素的神經(jīng)保護作用及其機理.pdf

1、楊梅(Myrica rubra Sieb.et Zucc.)是我國重要的果樹資源，有著2000多年的栽培歷史，楊梅葉常綠，原花色素(PAs)含量高，以獨特的表沒食子兒茶素-3-O-沒食子酸酯(EGCG)作為其末端單元和大部分延伸單元，具有抗氧化，抗菌，減肥，抗癌和抗炎活性，然而其神經(jīng)保護活性尚未見諸報道。楊梅葉原花色素的平均聚合度(mDP)(～6.7)低于葡萄籽(GSPA)和藍莓的原花色素，由于平均聚合度與其活性密切相關，研究不同聚合度

2、的原花色素對其神經(jīng)保護活性的影響值得進一步探討。本研究基于β-淀粉樣蛋白(Aβ)模型，以楊梅葉原花色素單體(EGCG)為陽性對照，研究了兩種楊梅葉原花色素(BLPs)(Sephadex-LH20純化的BLPs(SPBLPs)和超聲降解的BLPs(UDBLPs))的神經(jīng)保護作用，并分別通過分子、細胞和動物層面確定了其在抑制Aβ寡聚化，空間結構轉變和神經(jīng)毒性，阻斷SH-SY5Y神經(jīng)細胞凋亡，改善模式小鼠學習與空間記憶功能，減少腦內(nèi)斑塊的沉積

3、的潛在功能和可能的機制。結果如下:
　　1.楊梅葉原花色素能通過與Aβ結合形成復合物來干擾Aβ的自發(fā)聚集作用，從而抑制Aβ原纖維生成，Aβ形態(tài)變化和Aβ二級結構轉變，并且呈現(xiàn)劑量依賴關系。通過Aβ與原花色素結合時熱力學函數(shù)的變化得出，低平均聚合度的原花色素與Aβ具有更加緊密的結合作用。分子對接模擬結果顯示，隨著平均聚合度mDP的變化，原花色素靶向Aβ的結合位點也有所不同，低平均聚合度的原花色素更加靠近N端區(qū)域與核心疏水區(qū)HHQK序

4、列，形成的復合物也更加穩(wěn)定。
　　2.楊梅葉原花色素能減輕Aβ寡聚體誘導的神經(jīng)細胞毒性作用，影響神經(jīng)細胞的存活狀態(tài)，同時，UDBLPs的作用比SPBLPs強得多，在Aβ誘導的細胞毒性模型中兩種楊梅葉原花色素的神經(jīng)保護作用均在20μg/mL的劑量達到最大值。免疫印跡結果顯示，楊梅葉原花色素能夠上調Bcl-2與Bax比值，同時下調下游的caspase-3表達水平，從而進一步阻斷由Aβ寡聚體誘導的SH-SY5Y細胞的凋亡。
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5、.為了進一步探究楊梅葉原花色素在神經(jīng)保護活性上與葡萄籽原花色素(GSPA)的差別，選取活性較好的低聚原花色素UDBLPs、EGCG與GSPA進行比較。動物實驗表明，四個月大的APP/PSN轉基因小鼠在經(jīng)過UDBLPs，GSPA和EGCG藥物干預兩個月以后，經(jīng)過Morris水迷宮測試后發(fā)現(xiàn)，低聚楊梅葉原花色素能夠較為明顯地改善小鼠的學習與空間記憶水平。免疫組化與免疫印跡結果顯示，相比于空白對照組，經(jīng)過低聚楊梅葉原花色素干預后的APP/PS