成人毛囊器官培養(yǎng)、干細胞分選及其增殖分化調(diào)控的研究.pdf

1、該研究首先通過毛囊體外器官型培養(yǎng)的模型探討了敏樂定在毛囊周期中的作用以及可能機制.將從正常人頭皮皮下層拔出的毛囊置于無血清培養(yǎng)基中培養(yǎng),生長狀況良好,并且不可控制的因素較少,可保證實驗的重復(fù)性.該研究中還發(fā)現(xiàn)經(jīng)培養(yǎng)7天后毛囊β1整合素和K19表達均降低.說明在培養(yǎng)過程中干細胞的減少.敏樂定對β1整合素和K19的表達沒有明顯的影響,因此它對毛囊生長的促進作用可能與β1整合數(shù)和K19的關(guān)系并不密切.其次,該研究首次建立了快速粘附法分選毛囊干

2、細胞的方法,并借此探討了β-catenin信號分子在毛囊干細胞的增殖分化調(diào)節(jié)中的作用以及可能的信號途徑.利用干細胞粘附能力強的特點,將毛囊細胞懸液接種于包被有人膠原的平板中,對不同時間內(nèi)粘附上的細胞進行檢測.為了觀察經(jīng)粘附分選后毛囊細胞β-catenin的表達情況,該研究利用免疫細胞化學和原位雜交的方法從蛋白質(zhì)和m RNA水平進行了檢測.結(jié)果顯示,快速粘附細胞核中β-catenin蛋白水平有所增加,提示β-catenin蛋白參與了干細胞

3、增殖的調(diào)控.而mRNA則沒有顯著改變的原因在于,細胞內(nèi)β-catenin蛋白的分布與含量的調(diào)節(jié)主要是通過對β-catenin蛋白的穩(wěn)定性進行調(diào)節(jié)而實現(xiàn)的.為了進一步探討β-catenin的作用及其機制,該研究利用含有氨基端突變的β-catenin的表達質(zhì)粒對未經(jīng)分選的毛囊細胞進行了β-catenin基因轉(zhuǎn)染.結(jié)果發(fā)現(xiàn),轉(zhuǎn)染后的毛囊細胞核內(nèi)β-catenin表達增高.轉(zhuǎn)染細胞克隆形成率明顯增加,其中大克隆的增加并不明顯.K19的表達雖有增

4、加但程度也較低.提示毛囊細胞核內(nèi)β-catenin的增加促進了細胞的分裂增殖,但并沒有使干細胞增加,更可能是促進了干細胞的分裂分化.與既往的實驗研究結(jié)果相符,進一步說明了β-catenin對干細胞的增殖與分化的促進作用.為了了解β-catenin促進細胞增殖分化作用的分子機制,該研究利用Western Blot以及原位雜交的方法檢測了β-catenin作為轉(zhuǎn)錄因子所調(diào)節(jié)的目的基因c-myc基因的表達情況.結(jié)果顯示,轉(zhuǎn)染突變的β-cate

5、nin 后毛囊細胞c-Myc蛋白表達量明顯增加,mRNA水平也同樣增加,提示β-catenin 的增加促進了c-myc基因表達的轉(zhuǎn)錄與翻譯,從而推論出β-catenin 對毛囊細胞增殖分化的促進作用是通過促進c-myc基因的表達實現(xiàn)的.總之,該研究利用毛囊器官培養(yǎng)的模型證實了敏樂定對毛囊生長的促進作用,首次觀察到了它在此模型中對膠原代謝的影響,它的作用機制可能是通過抑制TGFβ1的過度表達而延緩毛囊退化期的出現(xiàn),從而相對延長了毛的生長期