FBXL20在癲癇患者及大鼠動(dòng)物模型中的表達(dá)和作用研究.pdf_第1頁(yè)
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1、目的:E3泛素連接酶FBXL20(F-box and leucine-rich repeat protein20)通過(guò)調(diào)控突觸膜胞外分泌調(diào)節(jié)蛋白1(regulating synaptic membrane exocytosis1,RIM1)的代謝來(lái)調(diào)節(jié)突觸囊泡的釋放,參與了多種神經(jīng)退行性疾病的病理生理過(guò)程。目前尚不清楚 FBXL20是否也參與了癲癇的病理過(guò)程中。本研究通過(guò)檢測(cè) FBXL20及 RIM1在顳葉癲癇患者皮質(zhì)及匹魯卡品癲癇大鼠

2、腦組織中的表達(dá)變化,并在動(dòng)物模型中通過(guò)慢病毒過(guò)表達(dá)FBXL20,探討FBXL20與癲癇的關(guān)系及意義。
  方法:1.表達(dá)部分:以顳葉癲癇患者手術(shù)切除病灶標(biāo)本(n=25)為癲癇組,以腦外傷減壓手術(shù)所切皮質(zhì)標(biāo)本(n=10)為對(duì)照組;40只 SD大鼠(約200g)采用腹腔給藥的方式,注射匹魯卡品(127 mg/kg),2周后出現(xiàn)癲癇自發(fā)發(fā)作的大鼠納入癲癇模型組;2月后仍未出現(xiàn)癲癇自發(fā)發(fā)作的大鼠納入對(duì)照組。采用免疫熒光對(duì) FBXL20的表

3、達(dá)進(jìn)行定位;免疫組化檢測(cè)FBXL20的表達(dá)水平;Western blot檢測(cè)FBXL20、RIM1的表達(dá)水平。2.干預(yù)部分:①癲癇動(dòng)物模型慢性期自發(fā)性發(fā)作行為學(xué)觀察:SD大鼠在匹魯卡品造模達(dá)到癲癇發(fā)作標(biāo)準(zhǔn)后隨機(jī)分為三組:海馬立體定向注射慢病毒空載體組(EP+LV-empty)、海馬立體定向注射慢病毒 FBXL20組(EP+LV-FBXL20)、假手術(shù)組(EP),持續(xù)視頻監(jiān)測(cè)記錄大鼠癲癇Racine評(píng)分及潛伏期。②慢病毒干預(yù)后檢測(cè)FBXL

4、20下游指標(biāo)RIM1的表達(dá)水平變化。
  結(jié)果:免疫熒光結(jié)果顯示 FBXL20主要表達(dá)于神經(jīng)元;免疫組化及Western blot結(jié)果均顯示癲癇患者皮質(zhì)、癲癇動(dòng)物模型皮質(zhì)與海馬中FBXL20表達(dá)較對(duì)照組明顯下降(P<0.05);免疫印跡示過(guò)表達(dá)組RIM1較對(duì)照組明顯升高(P<0.05)。匹魯卡品誘導(dǎo)出現(xiàn)癲癇自發(fā)性發(fā)作后(14-60d),LV-FBXL20組平均Racine評(píng)分較LV-empty組、sham組降低,潛伏期顯著延長(zhǎng)(

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