紫草羥基萘醌制備及其關鍵質量問題研究.pdf

1、紫草是歷版中國藥典收錄的常用中藥。羥基萘醌類化合物具有抗炎、抗菌、抗氧化、抗腫瘤等廣泛的藥理活性，是紫草清熱涼血、活血解毒等功效作用的有效部位，也是基于紫草進行創(chuàng)新藥物開發(fā)的重要原料。本論文以羥基萘醌為對象，以中藥五類新藥對有效部位的技術要求為指導，開展制備工藝和質量控制的關鍵問題研究，為紫草的深入開發(fā)應用提供科學依據。
　　建立羥基萘醌制備工藝，首先以羥基萘醌色素含量為指標對紫草藥材品種和產地進行了篩選。然后以羥基萘醌總色素及含

2、量最高的單體成分β,β'-二甲基丙烯酰阿卡寧的含量和轉移率為指標，優(yōu)化羥基萘醌的乙醇提取工藝，并建立了羥基萘醌的石油醚萃取工藝條件，最終確立了以95％乙醇作為提取溶劑，石油醚萃取的方法進行羥基萘醌制備。根據藥典方法進行化學成分的測定，所制備羥基萘醌含量在90%以上，符合中藥五類新藥對有效部位的要求。制備工藝操作簡單，易于放大。
　　建立主要羥基萘醌單體成分及總量測定的 HPLC分析方法，并進行了系統的方法學驗證，與藥典收載的UV光

3、度總量測定法進行了比較。優(yōu)化了RP-HPLC分離條件，以四氫呋喃-乙腈-0.17%甲酸水溶液43:8:49（v/v/v）為流動相，在Alltima C18色譜柱（250mm×4.6 mm，5μm）上進行等度洗脫，首次實現了針對阿卡寧（AK）、乙酰阿卡寧（ACAK）、β-乙酰氧基異戊酰阿卡寧（AOAK）、去氧阿卡寧（DOAK）、β,β'-二甲基丙烯酰阿卡寧（DAAK）以及α-甲基丁酰阿卡寧（MBAK）和異戊酰阿卡寧（IVAK）這一對異構體

4、在內的7種主要紫草羥基萘醌成分的分離，色譜峰形良好，分離度均大于1.5，AK、ACAK、AOAK、DOAK、DAAK、MBAK、IVAK的線性范圍分別為2~40μg·mL-1、100~200μg·mL-1、1.3~26μg·mL-1、5~1000μg·mL-1、13~260μg·mL-1、5~100μg·mL-1、20~400μg·mL-1，線性關系良好，精密度、重復性和回收率均滿足定量分析要求，適用于羥基萘醌單體成分及總色素含量的測定

5、。羥基萘醌總色素含量測定結果與藥典收載的 UV光度總量測定法結果無顯著差異，但對于有效物質成分群的物質組成反映更為明確，因而對于產品的質量控制更為科學、可靠。
　　羥基萘醌的指紋圖譜研究，我們以十批羥基萘醌產品為研究對象，以四氫呋喃-乙腈-0.17%甲酸水溶液43:8:49（v/v/v）為流動相，在Alltima C18色譜柱（250mm×4.6 mm，5μm）上進行等度洗脫分離，記錄518 nm下的色譜圖。并將十批羥基萘醌的色譜

6、圖導入國家藥典委員會中藥相似度評價系統2012版，生成了以 DAAK為參照羥基萘醌指紋圖譜，根據研究結果并考慮大生產的復雜性暫定羥基萘醌指紋圖譜的相似度應大于0.990。
　　綜上所述，我們研究了一種制備高純度羥基萘醌的提取工藝，該方法簡便可行，適用于工業(yè)生產。建立了一種 HPLC法測定包含一對同分異構體在內的羥基萘醌單體成分的含量測定方法，該方法建立明確羥基萘醌各單體成分的含量組成進行了準確的測定。生成了羥基萘醌 HPLC標準指