RSUME與IκB-NF-κB在小鼠垂體腺瘤AtT-20細胞中的表達及其意義.pdf

1、研究背景與目的：
　　垂體腺瘤是成人常見的神經(jīng)系統(tǒng)腫瘤之一，大部分垂體腺瘤是良性腫瘤，對周圍組織不具有侵襲破壞能力，但約43％垂體腺瘤因具有侵襲性導致手術難以完全切除或者切除難度增大，并且術后復發(fā)率較高。RWD結構小泛素化增強子（RWDcontainingsumoylationenhancer，RSUME）是近年來發(fā)現(xiàn)的一種在垂體腺瘤中高表達且可以調控小泛素化過程的因子。在缺氧等刺激因素下，可以誘導RSUME快速生成增加，RSUM

2、E與小泛素相關修飾因子-1（smallubiquitinrelatedmodifiers-1，SUMO-1）在泛素結合酶Ubc9作用下結合為RSUME-Ubc9-SUMO-1復合體，然后識別IκB上泛素結合位點，進而影響核轉錄因子κB抑制因子（inhibitorofnuclearfactorkappaB,IκB）穩(wěn)定性及活性，進一步對核轉錄因子（nuclearfactorkappaB，NF-κB）作用，從而調節(jié)細胞增殖。本研究擬通過研究

3、RSUME增強SUMO-1影響IκB/NF-κB通路在小鼠垂體腺瘤AtT-20細胞中的表達及意義，闡述RSUME、IκB/NF-κB對垂體腺瘤侵襲性發(fā)展的分子機制，為垂體腺瘤治療提供新的思考方向。
　　方法：
　　通過RSUME小干擾RNA（smallinterferingRNA，siRNA）轉染以及氯化鈷處理小鼠垂體腺瘤AtT-20細胞，行實時熒光定量PCR（q-PCR）檢測RSUME、IκB-α、NF-κB1的總mRNA

4、水平的改變，WB（蛋白質印跡法）檢測總蛋白RSUME，核蛋白IκB-α及NF-κB1水平的改變，流式細胞術檢測細胞凋亡水平，并用Transwell檢測垂體腺瘤侵襲能力的改變。
　　結果：
　?。?）不同濃度氯化鈷模擬缺氧處理小鼠垂體腺瘤AtT-20細胞后，RSUMEmRNA表達水平明顯上調（p＜0.05）,IκB-αmRNA及NF-κB1mRNA表達無明顯變化（p＞0.05）；RSUME、IκB-α蛋白表達水平明顯上調，NF

5、-κB1蛋白表達水平明顯下調。
　　（2）應用RSUME小干擾siRNA轉染小鼠垂體腺瘤AtT-20細胞后，RSUMEsiRNA轉染組的mRNA水平與RSUME陰性siRNA對照組及NC組相比明顯下調（p＜0.05），IκB-αmRNA及NF-κB1mRNA的表達水平三組之間無明顯變化（p＞0.05）；RSUMEsiRNA轉染組與RSUME陰性siRNA組及NC組中RSUME、IκB-α蛋白水平相比明顯下降（p＜0.05），而NF

6、-κB1蛋白的表達水平也隨著相應上升（p＜0.05）。
　?。?）與NC組及RSUME陰性siRNA轉染組對比，Transwell侵襲實驗中RSUMEsiRNA轉染組抑制AtT-20細胞侵襲（p＜0.05）。
　　（4）流式細胞術檢測RSUMEsiRNA轉染組、RSUME陰性siRNA轉染組、及NC組細胞凋亡發(fā)現(xiàn)有差異（p＜0.05）。
　　結論：
　　1、氯化鈷可以誘導AtT-20細胞中RSUME上調，RSUM