胃癌相關長鏈非編碼RNA的篩選與分析.pdf

1、目的：根據(jù)2015年的最新癌癥統(tǒng)計數(shù)據(jù)表明，胃癌(GC)在我國的發(fā)病率及死亡率均處于第二位。雖然近年來，我國在胃癌的診斷及治療上已經(jīng)取得了巨大的進步，但大多數(shù)患者在確診時已處于晚期階段，失去了行根治性手術的機會，即便進行了手術，甚至術后的輔助放化療、靶向及生物治療等，患者的復發(fā)率及轉移風險仍很高，進展期胃癌患者的5年生存率僅為30％-50%，很可能是因為胃癌具有極強異質性，其分子信號通路復雜,許多癌基因和抑癌基因的失調(diào)被認為是導致胃癌形

2、成的不可或缺的因素。在過去數(shù)十年里，短鏈非編碼RNA，尤其是miRNAs的功能及作用機制得到了充分的闡明，而另一類興起的長鏈非編碼RNA(lncRNAs)近來被發(fā)現(xiàn)在包括胃癌在內(nèi)的多種人類疾病中也發(fā)揮著重要功能。隨著芯片及測序技術的飛速發(fā)展，胃癌相關分子標志物得以不斷發(fā)掘。但大多數(shù)研究都著重于單個分子標志物，其用以胃癌診斷和預測的可靠性欠佳。因此，本課題利用Human LncRNA Microarray建立胃癌相關lncRNAs表達譜，

3、對有潛在研究價值的lncRNAs進行了初步驗證并對其臨床意義進行了探討，從而為后續(xù)完善胃癌相關的“分子標志群”，并基于胃癌分子標志群建立“胃癌相關lncRNAs診斷或預測模式”提供研究基礎。
　　方法：針對5個有明確胃癌家族史的胃癌患者，利用高通量基因芯片系統(tǒng)性地檢測了配對的癌及癌旁組織中l(wèi)ncRNAs和mRNAs的表達情況，建立了lncRNAs在胃癌中的差異表達譜。通過檢索文獻在表達譜中選出了3個可能有潛在功能的lncRNAs在

4、72對配對的胃癌及癌旁組織以及胃癌細胞株中運用qRT-PCR進行了驗證，并進一步對差異表達的mRNAs作了GO分析和Pathway分析。深入研究了上調(diào)的TUG1表達水平與胃癌患者臨床病理因素及預后的相關性，揭示其可能的臨床價值。
　　結果：我們通過lncRNA芯片篩選得到了胃癌癌及癌旁組織中差異表達的lncRNA共3107個，其中上調(diào)或下調(diào)超過2倍的lncRNA分別為1300個和1807個，上調(diào)或下調(diào)超過10倍的lncRNA分別有

5、50個和482個。結合文獻分析,選出了3個具有研究價值的LncRNAs：TUG1、HOTAIRM1、SNHG12，并分別在72對胃癌患者的配對組織以及胃癌細胞株中進行定量檢測， qRT-PCR結果與基因芯片的結果保持一致。對可靠的芯片結果中差異表達的mRNAs行GO分析顯示，有1898個上調(diào)mRNAs和1256個下調(diào)mRNAs富集于Biological Process；有1976個上調(diào)mRNAs和1349個下調(diào)mRNAs富集于Cellu

6、lar Component；有1846個上調(diào)mRNAs和1223個下調(diào)mRNAs富集于Molecular Function。此外，KEGG Pathway分析結果顯示:有47條信號通路與上調(diào)表達的mRNAs相關，12條信號通路與差異下調(diào)的mRNAs相關。相比于配對癌旁正常胃黏膜組織，lncRNA TUG1在腫瘤組織中的表達顯著上調(diào),且與腫瘤浸潤深度（P＝0.002）、淋巴結轉移（P＝0.034）、遠處轉移（P＝0.029）、TNM分期（

7、P＝0.008）以及脈管內(nèi)有無癌栓（P＝0.045）有關。Cox分析亦顯示：TUG1的表達水平（P＝0.031）與淋巴結轉移（P<0.001）、脈管內(nèi)有癌栓形成（P<0.001）、遠處轉移（P＝0.002）和TNM分期（P＝0.039）共為影響胃癌患者OS的獨立危險因素。
　　結論：本研究通過 lncRNA芯片成功構建了胃癌 lncRNA差異表達譜,利用qRT-PCR選取部分LncRNAs進行初步驗證，證實芯片可靠。其中，TUG1