HepG2細(xì)胞中SelS基因沉默對內(nèi)質(zhì)網(wǎng)硒蛋白mRNA表達(dá)的影響及脫靶效應(yīng)研究.pdf

1、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)是真核生物細(xì)胞中一個重要的細(xì)胞器,參與了細(xì)胞中蛋白質(zhì)的合成、修飾、折疊、組裝和運輸,同時也是細(xì)胞內(nèi)Ca2+的重要貯存器。研究表明,內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激與多種疾病有關(guān);內(nèi)質(zhì)網(wǎng)生物功能的正常發(fā)揮對細(xì)胞的存活起著重要的作用。硒是哺乳動物中的一種必需微量營養(yǎng)元素,在發(fā)現(xiàn)的25種哺乳動物硒蛋白中,有7種硒蛋白位于內(nèi)質(zhì)網(wǎng)上,分別是D2、Sep15、SelS、SelK、SelM、SelN和SelT。這些內(nèi)質(zhì)網(wǎng)硒蛋白中,除了D2的生物功能得到確定外,其他內(nèi)

2、質(zhì)網(wǎng)硒蛋白的生物功能并不清楚,但是研究表明,這些內(nèi)質(zhì)網(wǎng)硒蛋白與內(nèi)質(zhì)網(wǎng)生物功能有著密切的關(guān)系。
　　為了研究這些內(nèi)質(zhì)網(wǎng)硒蛋白之間的關(guān)系,本文以HepG2細(xì)胞為對象,探究內(nèi)質(zhì)網(wǎng)硒蛋白SelS基因沉默時對其它內(nèi)質(zhì)網(wǎng)硒蛋白mRNA表達(dá)水平的影響。主要結(jié)果如下:
　　(1)通過實驗篩選,設(shè)計了兩種SelS基因沉默的siRNA序列。運用MTT檢測法,檢測了不同濃度的SelSsiRNA對HepG細(xì)胞存活率的影響。結(jié)果發(fā)現(xiàn)高濃度的SelSs

3、iRNA會對細(xì)胞產(chǎn)生毒性作用,致使細(xì)胞死亡。流式細(xì)胞儀定量研究了SelS和SelK基因沉默對HepG2細(xì)胞凋亡的影響,結(jié)果表明24h內(nèi)的SelS和SelK基因沉默,不明顯增加HepG2細(xì)胞的凋亡率。
　　(2)通過RT-PCR,分別檢測了SelS、SelK和Derlin-1基因沉默時,內(nèi)質(zhì)網(wǎng)硒蛋白mRNA表達(dá)水平的變化。結(jié)果發(fā)現(xiàn)在SelS基因沉默24h后,其他內(nèi)質(zhì)網(wǎng)硒蛋白mRNA表達(dá)水平受到不同程度的下調(diào),而且利用兩種序列的Sel