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文檔簡介
1、結直腸癌(Colorectal cancer, CRC)是全球最常見的腫瘤,經濟的發(fā)展、生活方式、飲食習慣的改變導致其發(fā)生率、死亡率明顯上升并表現(xiàn)為年輕化,危害人類健康。CRC的發(fā)生不易察覺,當病人確診時已是晚期,如何更早的發(fā)現(xiàn)及治療成為研究的難題。ADH1B是乙醇脫氫酶家族的成員,研究發(fā)現(xiàn)ADH1B的表達量在結直腸癌與正常組織中存在著明顯的差異。本實驗將ADH1B基因過表達質粒轉染SW620細胞,構建ADH1B基因過表達穩(wěn)轉細胞株,來
2、探討ADH1B基因過表達對SW620細胞增殖及遺傳物質穩(wěn)定性的影響。此外,采用奧沙利鉑和阿司匹林單獨及聯(lián)合用藥的方案,檢測藥物對細胞增殖的影響。旨在通過研究ADH1B基因與結直腸癌之間的相互關系,探討基因手段與藥物化療聯(lián)合治療結直腸癌的方法,降低癌細胞多藥耐藥性,減輕患者痛苦,提高生存質量。
本研究主要內容包括:⑴通過脂質體轉染獲得過表達ADH1B基因的穩(wěn)定細胞系,采用Western blot和Q-PCR技術分別從蛋白質水平、
3、RNA水平檢測ADH1B基因過表達效果;利用克隆形成實驗、CCK-8法、細胞計數(shù)法來探究ADH1B基因過表達對SW620細胞增殖的影響。結果表明,過表達ADH1B基因顯著促進SW620細胞的增殖(P<0.05)。⑵通過微核試驗來觀察過表達ADH1B基因對SW620細胞遺傳物質的影響。實驗結果顯示,與未過表達的SW620細胞相比,過表達組細胞的微核率、核芽率明顯減少(P<0.05)。推測ADH1B基因與結直腸癌細胞遺傳物質的損傷存在一定的
4、聯(lián)系,過表達ADH1B基因可能會使得細胞通過某種方式清除微核,從而引起SW620細胞微核率降低,減少遺傳物質損傷。⑶通過CCK-8法與臺盼藍染色來觀察單獨用藥和兩種藥物不同貫序用藥對SW620細胞的抑制作用,采用Annexin V-FITC&PI染色法區(qū)分細胞凋亡早、中、晚期以及壞死細胞,并利用半數(shù)抑制濃度(50%concentration of inhibition, IC50)確定藥物的最佳使用濃度。結果顯示,不同用藥組對細胞抑制作
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