乙醇脫氫酶ADH1B基因對人結直腸癌細胞增殖及遺傳物質穩(wěn)定性的影響.pdf

1、結直腸癌(Colorectal cancer, CRC)是全球最常見的腫瘤，經濟的發(fā)展、生活方式、飲食習慣的改變導致其發(fā)生率、死亡率明顯上升并表現(xiàn)為年輕化，危害人類健康。CRC的發(fā)生不易察覺，當病人確診時已是晚期，如何更早的發(fā)現(xiàn)及治療成為研究的難題。ADH1B是乙醇脫氫酶家族的成員，研究發(fā)現(xiàn)ADH1B的表達量在結直腸癌與正常組織中存在著明顯的差異。本實驗將ADH1B基因過表達質粒轉染SW620細胞，構建ADH1B基因過表達穩(wěn)轉細胞株，來

2、探討ADH1B基因過表達對SW620細胞增殖及遺傳物質穩(wěn)定性的影響。此外，采用奧沙利鉑和阿司匹林單獨及聯(lián)合用藥的方案，檢測藥物對細胞增殖的影響。旨在通過研究ADH1B基因與結直腸癌之間的相互關系，探討基因手段與藥物化療聯(lián)合治療結直腸癌的方法，降低癌細胞多藥耐藥性，減輕患者痛苦，提高生存質量。
　　本研究主要內容包括：⑴通過脂質體轉染獲得過表達ADH1B基因的穩(wěn)定細胞系，采用Western blot和Q-PCR技術分別從蛋白質水平、

3、RNA水平檢測ADH1B基因過表達效果；利用克隆形成實驗、CCK-8法、細胞計數(shù)法來探究ADH1B基因過表達對SW620細胞增殖的影響。結果表明，過表達ADH1B基因顯著促進SW620細胞的增殖(P＜0.05)。⑵通過微核試驗來觀察過表達ADH1B基因對SW620細胞遺傳物質的影響。實驗結果顯示，與未過表達的SW620細胞相比，過表達組細胞的微核率、核芽率明顯減少(P＜0.05)。推測ADH1B基因與結直腸癌細胞遺傳物質的損傷存在一定的

4、聯(lián)系，過表達ADH1B基因可能會使得細胞通過某種方式清除微核，從而引起SW620細胞微核率降低，減少遺傳物質損傷。⑶通過CCK-8法與臺盼藍染色來觀察單獨用藥和兩種藥物不同貫序用藥對SW620細胞的抑制作用，采用Annexin V-FITC&PI染色法區(qū)分細胞凋亡早、中、晚期以及壞死細胞，并利用半數(shù)抑制濃度(50％concentration of inhibition, IC50)確定藥物的最佳使用濃度。結果顯示，不同用藥組對細胞抑制作