制備傷寒疫苗大腸桿菌發(fā)酵過程的質量控制及影響.pdf

1、近幾年來，GMP、GLP及相關質量控制的理念逐漸深入到生物制品生產及實驗的整個過程中。蘭州生物制品研究所第一研究室研制的傷寒Vi多糖蛋白結合疫苗是以重組銅綠假單胞菌外毒素A（rEPA）為蛋白，由大腸桿菌表達，因此，宿主大腸桿菌發(fā)酵后菌群質量和量的高低直接影響了傷寒Vi多糖蛋白結合疫苗的產量。
　　本次試驗是根據GMP的相關質量控制要求，運用質量管理手段和工具，對宿主大腸桿菌發(fā)酵過程及其涉及的相關實驗系統實施質量控制，實驗結果如下：

2、
　　1、實驗室系統的影響性評估。依據系統影響性評估原理，對傷寒Vi多糖蛋白結合疫苗實驗室系統進行了系統影響性評估，該階段評估結果為：
　　（1）直接影響系統包括：空氣凈化系統、工藝用水系統、工藝氣體系統、發(fā)酵系統、高壓滅菌系統、干熱滅菌系統、實驗室檢定系統、生物安全柜，中空纖維系統、層析系統、37℃恒溫培養(yǎng)、地秤、藥品保存箱、37℃搖床式培養(yǎng)箱；
　?。?）間接影響系統為：冰箱、配電系統；
　?。?）無影響系統

3、是：消防系統、洗衣機。
　　2、發(fā)酵系統關鍵組分評估。依據關鍵組分評估原理，對大腸桿菌發(fā)酵系統進行了關鍵組分評估，該階段評估結果為：
　?。?）發(fā)酵系統的關鍵組分，包括：罐體、pH傳感器、DO傳感器、溫度傳感器、計算機控制單元、攪拌器、轉速傳感器、消泡漿、消泡傳感器、流量計、壓力表、CIP控制單元。
　?。?）發(fā)酵系統的非關鍵組分，包括：夾套、進料口、出料口、人孔、電機、控制閥門、電路。
　　3、風險管理。該階段

4、經過風險識別、風險分析、風險評估，最終確定出實驗中各組分的風險級別：pH值、DO值、溫度、系統壓力及發(fā)酵系統的無菌性為發(fā)酵過程中的高風險點，需要進行風險控制。
　　4、高風險點的管控。該階段分為驗證和計量兩個部分：
　?。?）驗證部分：實驗針對直接影響系統中的脈動真空滅菌器、生物安全柜和發(fā)酵罐進行了驗證，通過驗證發(fā)現脈動真空滅菌器存在溫度漂移現象，經過維修和調試后再次驗證，其滅菌能力符合GMP要求。
　?。?）計量部分

5、：根據關鍵組分評估和風險評估的結果，對pH傳感器、DO傳感器、溫度傳感器、系統壓力表、流量計、轉速傳感器以及實驗室檢定系統中的分光光度計、pH計、電子天平、電泳儀、凝膠成像系統、顯微鏡等儀器設備進行計量，對故障壓力表進行了更換。
　　5、宿主大腸桿菌的發(fā)酵實驗。在實施質量控制前后分別對宿主大腸桿菌進行了連續(xù)三批發(fā)酵培養(yǎng)，通過培養(yǎng)結果對比可知，質量控制后的發(fā)酵結果優(yōu)于質量控制前，菌體密度（OD600值）由17～25之間增加至27～3