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文檔簡介
1、目的:研究芝麻素對脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)/D-半乳糖胺(D-galactosamine, D-GalN)誘導(dǎo)的小鼠暴發(fā)性肝衰竭( fulminnant hepatic failure, FHF)的保護作用及其分子機制。
方法:
1.在體內(nèi)實驗,Balb/c小鼠隨機分為6組,包括空白對照組、芝麻素對照組、模型組、芝麻素低劑量干預(yù)組、芝麻素中劑量干預(yù)組和芝麻素高劑量干預(yù)組。以腹腔注射LPS
2、(50μg/kg)/D-GalN(800 mg/kg)建立小鼠FHF模型;分別以10,30,100 mg/kg芝麻素每8 h一次,共3次給小鼠灌胃,隨后腹腔注射LPS/D-GalN,作為低、中、高劑量芝麻素干預(yù)組;以100 mg/kg芝麻素單獨給藥作為藥物對照組。分別觀察48 h小鼠生存率,檢測血清中ALT和AST活性,HE染色,TUNEL(transferase-mediated deoxyuridine triphosphate n
3、ick-end labeling)和免疫組織化學(xué)( immunohistochemistry, IHC)檢測Active-Caspase-3評價肝臟組織病理損傷程度和凋亡。酶聯(lián)免疫吸附試驗(enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA)檢測血清和肝組織中腫瘤壞死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)的表達;定量逆轉(zhuǎn)錄PCR(quantitative reverse tr
4、anscription PCR, QRT-PCR)測定肝組織中TNF-α mRNA的表達;Western blot檢測肝臟髓過氧化物酶(myeloperoxidase, MPO)、細(xì)胞間黏附分子-1(intercellular adhesion molecule-1,ICAM-1)、內(nèi)皮細(xì)胞粘附分子-1(endothelial cell adhesion molecule-1,ECAM-1)、toll樣受體4(toll like rec
5、eptor4,TLR4)、p-IκB、p-p38的表達。
2.在體外實驗,小鼠巨噬細(xì)胞系RAW264.7細(xì)胞給予芝麻素處理30 min后,再用LPS刺激6 h。應(yīng)用ELISA測定細(xì)胞培養(yǎng)上清中TNF-α水平;熒光素酶報告基因檢測兩種轉(zhuǎn)錄因子AP-1和NF-κB的轉(zhuǎn)錄活性;流式細(xì)胞術(shù)分析巨噬細(xì)胞表面TLR4的表達。
結(jié)果:
1.芝麻素劑量依賴性地改善LPS/D-GalN誘導(dǎo)的小鼠存活率和降低血清中ALT和AS
6、T活性。
2.芝麻素明顯減輕LPS/D-GalN誘導(dǎo)的小鼠肝臟病理損傷和凋亡。HE顯示,芝麻素顯著減輕LPS/D-GalN誘導(dǎo)的小鼠肝臟壞死面積、組織結(jié)構(gòu)破壞及出血程度。TUNEL染色結(jié)果表明,芝麻素明顯減少LPS/D-GalN誘導(dǎo)的小鼠肝細(xì)胞凋亡。IHC檢測肝組織切片中Active-Caspase-3的表達結(jié)果表明,芝麻素明顯抑制LPS/D-GalN誘導(dǎo)的小鼠肝臟中Active-Caspase-3表達。
3.芝麻素
7、能明顯減少LPS/D-GalN誘導(dǎo)的小鼠肝臟中性粒細(xì)胞的募集和細(xì)胞粘附分子的表達。
4.芝麻素能明顯抑制 LPS誘導(dǎo)的巨噬細(xì)胞和小鼠血清及肝臟中TNF-α的表達。
5.小鼠和巨噬細(xì)胞實驗證實,芝麻素抑制LPS誘導(dǎo)的轉(zhuǎn)錄因子AP-1和NF-κB活化,p38 MAPK和NF-κB信號激活及TLR4的表達。
結(jié)論:芝麻素對脂多糖/D-半乳糖胺誘導(dǎo)的小鼠暴發(fā)性肝衰竭具有保護作用。這種保護作用可能與下調(diào)巨噬細(xì)胞表面T
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