

版權說明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內(nèi)容提供方,若內(nèi)容存在侵權,請進行舉報或認領
文檔簡介
1、動物的繁殖機能主要是受促性腺激素釋放激素神經(jīng)元(gonadotropin-releasing hormone neurons,GnRH neurons)調(diào)控,GnRH神經(jīng)元合成分泌的GnRH以脈沖的方式從正中隆起釋放進入垂體門脈系統(tǒng),到達腺垂體并特異性地與促性腺細胞上的受體結合,刺激腺垂體合成和分泌LH、FSH,最終調(diào)節(jié)動物的生殖行為。星形膠質(zhì)細胞(astrocytes,AST)是一種特殊的膠質(zhì)細胞,連續(xù)地分布于整個中樞神經(jīng)系統(tǒng),執(zhí)行著
2、復雜的功能。近年來,隨著學者們對星形膠質(zhì)細胞的深入研究發(fā)現(xiàn),除了GnRH神經(jīng)元,星形膠質(zhì)細胞分泌的膠質(zhì)因子PGE2能夠通過調(diào)節(jié)GnRH神經(jīng)元的活性和分泌來間接調(diào)節(jié)動物的繁殖。然而,GnRH神經(jīng)元分泌的GnRH能否反饋調(diào)節(jié)星形膠質(zhì)細胞仍沒有報道。本實驗利用體外培養(yǎng)的大鼠下丘腦星形膠質(zhì)細胞,探究GnRH對星形膠質(zhì)細胞分泌PGE2的調(diào)控機制。
其主要目標為:
?。?)探究星形膠質(zhì)細胞上是否存在GnRHR;
?。?)在
3、體外條件下,GnRH是否影響培養(yǎng)星形膠質(zhì)細胞中PGE2的表達;
?。?)COX在GnRH調(diào)節(jié)星形膠質(zhì)細胞分泌PGE2中的作用;
?。?)MAPK信號通路是否參與GnRH對星形膠質(zhì)細胞PGE2表達的調(diào)節(jié)。為了有效研究GnRH對體外培養(yǎng)星形膠質(zhì)細胞PGE2表達的影響,研究如下:
?。?)實驗選取1–3日齡的SD新生大鼠,分離下丘腦進行原代和傳代培養(yǎng),并多次純化達到純化率為99%以上的星形膠質(zhì)細胞,為后續(xù)研究提供了大量
4、高純度、符合要求的細胞。
(2)為了探究星形膠質(zhì)細胞上是否存在GnRHR,實驗利用免疫熒光、基因測序及Western Blot方法檢測星形膠質(zhì)細胞上是否存在GnRHR,結果顯示星形膠質(zhì)細胞上存在GnRHR,為后續(xù)研究奠定基礎。
?。?)為了探究GnRH對培養(yǎng)星形膠質(zhì)細胞中PGE2表達的影響,實驗選取10-12 mol/L、10-10 mol/L、10-8 mol/L、10-6 mol/L的GnRH刺激體外培養(yǎng)的星形膠質(zhì)
5、細胞,分別在1 h、6 h、12h、24 h、48 h通過ELISA檢測細胞培養(yǎng)液中PGE2的表達量。結果顯示,12 h時10-10 mol/L GnRH處理組與對照組相比PGE2的表達量升高,且差異顯著(P<0.05);10-8 mol/L和10-6 mol/L的GnRH處理組與對照組相比PGE2的表達量減少,且差異顯著(P<0.05)。
(4)為了探究COX在GnRH調(diào)節(jié)星形膠質(zhì)細胞分泌PGE2中的作用,實驗選取10-10
6、 mol/L GnRH刺激細胞,通過熒光定量PCR、ELISA和 WesternBlot檢測在1 h、6 h、12 h、24 h、48 h時COX-1和COX-2的mRNA和蛋白的表達水平。結果顯示,COX-1 mRNA的表達量在12 h時增加,COX-2 mRNA的表達量在6 h和12 h時顯著增加,與COX-1相比上調(diào)量更大;通過ELISA和Western Blot檢測結果發(fā)現(xiàn),12 h后COX-1和COX-2的表達量均上調(diào),且CO
7、X-2比 COX-1上調(diào)幅度更大,表明COX-2與COX-1相比起更主要的作用。
為了驗證GnRH刺激星形膠質(zhì)細胞后是否通過上調(diào)COX-1和COX-2而引起PGE2的表達升高,分別用50 nmol/L SC-560和3μmol/L NS-398預處理星形膠質(zhì)細胞后,通過ELISA檢測上清中PGE2含量。結果顯示,GnRH+SC-560組和GnRH+NS-398組對GnRH誘導星形膠質(zhì)細胞分泌的PGE2均有抑制作用,而且NS-3
8、98對細胞分泌PGE2的抑制作用更強。表明COX-1和COX-2對GnRH誘導星形膠質(zhì)細胞分泌的PGE2均有影響,而且COX-2起更主要的作用。
(5)為了研究p38、JNK、ERK三條經(jīng)典的MAPK信號通路在GnRH調(diào)節(jié)星形膠質(zhì)細胞分泌PGE2中的作用,實驗選取20μmol/L p38抑制劑SB203580、10μmol/L JNK抑制劑 SP600125、10μmol/LERK抑制劑U0126預處理星形膠質(zhì)細胞后分別加入1
9、0-10 mol/L GnRH預處理星形膠質(zhì)細胞12 h,通過ELISA檢測上清中PGE2的含量。結果顯示,三種抑制劑均能夠抑制GnRH上調(diào)的PGE2,且U0126的抑制效果最明顯,表明p38、JNK、ERK信號通路對GnRH誘導星形膠質(zhì)細胞分泌PGE2的過程具調(diào)控作用,其中ERK信號通路對其調(diào)控作用最明顯。
MAPK通路抑制劑處理星形膠質(zhì)細胞后,通過熒光定量PCR和Western Blot檢測COX-1和COX-2的表達水平
10、。結果顯示,SB203580和U0126能夠下調(diào)COX-1的mRNA和蛋白的表達,SP600125對星形膠質(zhì)細胞COX-1無影響;SB203580、SP600125和U0126處理星形膠質(zhì)細胞后均能顯著下調(diào)COX-2的mRNA和蛋白的表達水平,其中U0126的抑制效果最明顯。該結果結合上述PGE2的表達變化表明,GnRH通過p38/ERK-COX-1和p38/JNK/ERK-COX-2信號通路促進星形膠質(zhì)細胞PGE2的產(chǎn)生,且p38/J
11、NK/ERK-COX-2途徑在產(chǎn)生PGE2的過程中起更重要的作用。
綜上所述,該實驗可以得到以下結論:
?。?)體外培養(yǎng)的星形膠質(zhì)細胞能夠表達GnRHR,為研究GnRH調(diào)節(jié)星形膠質(zhì)細胞功能奠定了形態(tài)學依據(jù)。
?。?)GnRH影響星形膠質(zhì)細胞PGE2的表達,較高濃度(10-8 mol/L、10-6 mol/L)時抑制細胞PGE2的產(chǎn)生,較低濃度(10-10 mol/L)時對PGE2的表達具顯著促進作用。
溫馨提示
- 1. 本站所有資源如無特殊說明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請下載最新的WinRAR軟件解壓。
- 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請聯(lián)系上傳者。文件的所有權益歸上傳用戶所有。
- 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網(wǎng)頁內(nèi)容里面會有圖紙預覽,若沒有圖紙預覽就沒有圖紙。
- 4. 未經(jīng)權益所有人同意不得將文件中的內(nèi)容挪作商業(yè)或盈利用途。
- 5. 眾賞文庫僅提供信息存儲空間,僅對用戶上傳內(nèi)容的表現(xiàn)方式做保護處理,對用戶上傳分享的文檔內(nèi)容本身不做任何修改或編輯,并不能對任何下載內(nèi)容負責。
- 6. 下載文件中如有侵權或不適當內(nèi)容,請與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
- 7. 本站不保證下載資源的準確性、安全性和完整性, 同時也不承擔用戶因使用這些下載資源對自己和他人造成任何形式的傷害或損失。
最新文檔
- P38 MAPK和GCR在糖皮質(zhì)激素調(diào)節(jié)星形膠質(zhì)細胞GnRH表達中的作用.pdf
- 谷氨酸在星形膠質(zhì)細胞體積調(diào)節(jié)機制中的作用.pdf
- 大鼠大腸粘膜癌變過程中β-catenin、COX-2及PGE2的表達.pdf
- MAPK信號通路在氯化鎘誘導星形膠質(zhì)細胞凋亡中作用的初步研究.pdf
- 跳躍運動下COX-2、PGE2及相關因子在大鼠跟腱末端區(qū)的表達研究.pdf
- PGE2上調(diào)THP-1巨噬細胞VEGF表達.pdf
- TNFα激活的星形膠質(zhì)細胞在癲癇復發(fā)中的作用.pdf
- P物質(zhì)對腦膜炎奈瑟菌抗原誘導小膠質(zhì)細胞表達COX-2及分泌PGE2的影響及分子機制初探.pdf
- Bystin在反應性星形膠質(zhì)細胞中的表達及其功能研究.pdf
- 在腦缺血預處理誘導腦缺血耐受過程中p38MAPK在星形膠質(zhì)細胞的表達.pdf
- nkx6.1在星形膠質(zhì)細胞發(fā)育過程中的作用
- 星形膠質(zhì)細胞活化在脊髓損傷修復中的作用及其調(diào)控.pdf
- FEZ1在星形膠質(zhì)細胞中的表達及其功能研究.pdf
- PGE2、Bim和Bcl-xL在結直腸癌中的表達及意義.pdf
- 缺氧誘導因子在星形膠質(zhì)細胞鐵代謝中的作用.pdf
- 前列腺液中COX-2和PGE2與CNBP癥狀相關性研究.pdf
- COX-2在人腦膠質(zhì)瘤中的表達和促血管生成作用研究.pdf
- 星形膠質(zhì)細胞在帕金森病神經(jīng)元鐵代謝紊亂中的調(diào)節(jié)作用研究.pdf
- 星形膠質(zhì)細胞在桶狀皮層功能及可塑性中的作用.pdf
- 糖皮質(zhì)激素對星形膠質(zhì)細胞分泌GnRH的調(diào)控機制.pdf
評論
0/150
提交評論