紅樹植物內生真菌生物活性及菌株A-1-2-3次級代謝產物的初步研究.pdf

1、近年來，隨著研究熱點的轉移，新藥的研究開發(fā)已突破了陸生資源的束縛，拓展到了生態(tài)和物種遠比陸地生境復雜多樣的海洋。紅樹植物生長于海岸潮間帶，其獨特的生存環(huán)境賦予它豐富的微生物資源，是當前倍受重視的藥用新資源。 本文對福建省九龍江口浮宮鎮(zhèn)草埔頭紅樹林區(qū)木欖(Bruguieragymnorrhiza)和秋茄(Kandeliacandel)2種紅樹植物的內生真菌資源進行為期1年的種群動態(tài)調查并對這些菌株的抗菌、抗腫瘤、乙酰膽堿酯酶及胰蛋

2、白酶抑制劑活性進行了初步研究。對活性菌株A-1-2-3的代謝產物進行分離純化并對分離得到的化合物進行結構鑒定和生理活性研究，為深入開發(fā)和保護紅樹植物內生真菌藥用資源提供理論依據(jù)，并期望得到有開發(fā)前景的候選藥物先導化合物。 從2種紅樹植物的樹葉、樹皮和樹根樣品中分離到290株內生真菌。對其種群動態(tài)進行初步考察，結果顯示，木欖和秋茄內生真菌數(shù)量高峰期分別為4月份和10～12月份；青霉(Penicillium)、交鏈孢(Alterna

3、ria)、Diaporthe和無孢目(thenonsporulatinggroups)是秋茄中的主要優(yōu)勢屬；木欖內生真菌主要優(yōu)勢屬為頭孢霉(Cephalosporium)、交鏈孢、青霉等。不同宿主對內生真菌的季節(jié)分布有重要的影響。以枯草芽孢桿菌(Bacillussubtilis)、大腸桿菌(Escherichiacoli)、金黃色葡萄球菌(Staphlococcusaureus)、白色假絲酵母(Candidaalbicans)、黑曲霉(

4、Aspergillusniger)為指示菌，采用瓊脂擴散法對這些菌株進行抗菌活性檢測，共篩選得到活性菌株40株，占總菌株數(shù)的13.8％；采用MTT法對其體外抗腫瘤活性進行檢測，發(fā)現(xiàn)17株內生真菌對KB(人口腔上皮癌)和/或Raji(人B淋巴瘤)細胞具有抑制作用，占總菌株數(shù)的5.9％。生物活性菌株分布于青霉、交鏈孢、擬青霉、無孢目等10個不同的分類單元中，2種宿主植物內生真菌抗菌及抗腫瘤活性均有不同程度的季節(jié)差異性。 菌株A-1-

5、2-3分離自秋茄植物的葉子，經分子鑒定為一株擬莖點霉(Phomopsissp.)。本文采用固體培養(yǎng)、有機溶劑提取、分相萃取、柱層析、和重結晶等分離純化方法從其發(fā)酵產物中分離到9個純的化合物(Y6，A4，A3，Y29，Y10，A5，Y9，A1和SRS39)，并采用核磁共振(NMR)波譜解析結合電噴霧質譜(ESI-MS)的方法鑒定其結構，經數(shù)據(jù)庫搜索，發(fā)現(xiàn)有5個結構(A3，Y29，Y10，Y9和SRS39)未見文獻報道，為新化合物。發(fā)現(xiàn)上述

6、9個化合物都屬于聚酮類化合物，包括真菌環(huán)氧二烯類化合物(Y10，A5)、松胞菌素類化合物(Y9，A1)、異苯并呋喃酮類化合物(Y6，A4，A3，Y29)以及大環(huán)內酯(SRS39)4種類型。采用單晶衍射X-ray的解析的方法對其中1個新結晶化合物Y10進行晶體結構研究，確定該化合物為去乙?；h(huán)氧二烯(Deacetylmycoepoxydiene)，未見文獻報道其晶體結構。 對上述化合物中的7個量較多的化合物進行抗菌、抗腫瘤、乙酰膽

7、堿酯酶及胰蛋白酶抑制劑活性檢測。結果表明，7個化合物對Raji細胞都具有不同程度的抑制作用，其中化合物Y10，A5，Y9和A1具有很強的抑制活性，IC50分別為3.0μg/mL、5.6μg/mL、2.5μg/mL和250ng/mL，而沒有檢測到其他活性，這個結果也與出發(fā)菌株A-1-2-3初篩結果相吻合，是否具有其它生物活性還有待進一步研究。 新化合物Y10(Deacetylmycoepoxydiene)與已知化合物A5(myco

8、epoxydiene)結構骨架新穎，且都具有很強的體外抗腫瘤活性，本文采用流式細胞儀測定其對細胞周期的影響，結合單細胞凝膠電泳和DNA片斷化“DNAladder”檢測方法初步研究其作用機理。結果表明，Deacetylmycoepoxydiene和mycoepoxydiene可能不是通過誘導細胞凋亡機制作用于腫瘤細胞的，其確切機制還有待進一步研究。 本文結果表明，紅樹植物內生真菌中蘊藏著較豐富的抗菌和抗腫瘤活性物質產生菌，同時也蘊