S100A4對CNE2細胞侵襲及EMT的影響.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、目的：構建 S100A4基因高表達載體，建立穩(wěn)定高表達 S100A4基因的CNE2細胞系，研究S100A4轉入對CNE2細胞的影響；測定與分析EMT標志物E-cadherin和Fibronectin、基質金屬蛋白酶MMP2和MMP9表達水平，探討 S100A4基因表達與 CNE2細胞侵襲能力及EMT的關系。
　　方法：本研究通過培養(yǎng) CNE2細胞，獲取 cDNA，PCR擴增S100A4片段，構建高表達 S100A4基因的pCMV-

2、S100A4重組質粒；采用脂質體法轉染 CNE2細胞，G418篩選，克隆挑選，建立S100A4穩(wěn)定高表達的CNE2細胞系，以pCMV-CNE2細胞系、以未轉染的CNE2細胞系為對照；Western blotting檢測S100A4蛋白的表達能力；MTT法繪制細胞生長曲線；Western blotting，檢測 E-cadherin、Fibronectin、MMP2及MMP9的表達；Transwell實驗，檢測細胞侵襲能力變化。
　

3、　結果：1、成功構建 pCMV-S100A4重組質粒；2、pCMV-S100A4-CNE2細胞穩(wěn)定高表達 S100A4；3、pCMV-S100A4-CNE2細胞系生長增殖速度加快；4、pCMV-S100A4-CNE2侵襲細胞計數(shù)增多；5、pCMV-S100A4-CNE2細胞 E-cadherin蛋白表達降低、Fibronectin、MMP2及MMP9表達增強。
　　結論：
　　1、S100A4導入 CNE2細胞，其生長增殖速

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