曲酸脂質體、囊泡的制備及體外透皮特性研究.pdf

1、第一部分：建立曲酸脂質體和囊泡包封率的測定方法
　　目的：建立曲酸 HPLC測定方法，建立曲酸脂質體、囊泡的包封率測定方法。
　　方法：
　　1.建立高效液相色譜法（HPLC）測定曲酸的含量，對液相條件的穩(wěn)定性、重復性、精密度等進行考察。
　　2.采用微柱離心法測定曲酸脂質體包封率（Entrapment efficiency， EE），確定離心條件，考察該方法的穩(wěn)定性與重復性。
　　3.采用超速離心法測定曲

2、酸非離子表面活性劑囊泡包封率，考察其重復性。
　　結果：
　　1.建立了測定曲酸含量的HPLC方法，方法準確可靠，可用于計算包封率。
　　2.建立的微柱離心法可有效分離游離的曲酸和脂質體，方法精確度高，重現(xiàn)性好，在選定的柱高和離心條件下，脂質體的回收率能夠滿足包封率測定的要求。
　　3.建立的超速離心法可有效分離游離的曲酸和囊泡，方法重現(xiàn)性滿足包封率測定的要求。
　　第二部分：曲酸脂質體制備工藝及處方優(yōu)化<

3、br>　　目的：確定曲酸脂質體的最優(yōu)制備工藝與處方。
　　方法：
　　1.分別采用薄膜分散法、逆相蒸發(fā)法、醋酸鈣梯度法、硫酸銨梯度法制備 KA-L，以包封率為指標，選擇最優(yōu)的制備方法進行單因素實驗。
　　2.采取單因素實驗，對制備工藝、處方中的各個因素不同水平下的包封率進行考察，從中篩選出3個因素用于星點設計-效應面優(yōu)化法，以包封率與載藥量（Drug loading efficiency，DL）為指標，將二者統(tǒng)一為總評

4、歸一值（OD），采用多元非線性模型擬合，根據 OD的大小確定出最優(yōu)的曲酸脂質體制備工藝、處方，預測最優(yōu)的包封率與載藥量，并對最佳制備方法進行驗證。
　　結果：
　　1.采用薄膜分散法、逆相蒸發(fā)法、醋酸鈣梯度法、硫酸銨梯度法四種方法制備曲酸脂質體結果顯示，醋酸鈣梯度法制備的包封率最高。
　　2.通過對曲酸脂質體處方和制備工藝的單因素考察，確定星點設計-效應面法考察的3個因素分別為：曲酸/磷脂（m/m，X1）、膽固醇/磷脂

5、（m/m，X2）、醋酸鈣濃度（mol·L-1，X3）。通過繪制等高線圖和效應面圖，確定最優(yōu)處方 X1=0.09、X2=0.125、X3=0.15mol·L-1，通過擬合方程計算得到預測包封率為40.645％，載藥量為3.078%，而實際測得包封率為：（41.19±1.071）%，載藥量為：（3.064±0.029）%，與預測值偏差分別為：1.341%和-0.877%。
　　第三部分：曲酸囊泡制備工藝及處方優(yōu)化
　　目的：確定

6、曲酸囊泡的最優(yōu)制備工藝與處方。
　　方法：
　　1.分別采用薄膜分散法、逆相蒸發(fā)法制備曲酸囊泡，以包封率為指標，選擇最優(yōu)的制備方法進行單因素實驗。
　　2.采用單因素實驗，對制備工藝、處方中的各個因素不同水平下的包封率進行考察，從中篩選3個因素用于星點設計-效應面優(yōu)化法，以包封率與載藥量為指標，將二者統(tǒng)一為總評歸一值（OD），對結果采用多元非線性模型擬合，根據 OD值的大小確定最優(yōu)曲酸囊泡制備工藝、處方，預測最優(yōu)包封率

7、與載藥量，并對最佳制備方法進行驗證。
　　結果：
　　1.薄膜分散法、逆相蒸發(fā)法制備曲酸囊泡的結果顯示，逆相蒸發(fā)法制備的曲酸囊泡的包封率最高。
　　2.通過對曲酸囊泡處方和制備工藝的單因素考察，確定了星點設計-效應面法考察的3個因素分別為：曲酸投藥量（mg，X1），膽固醇的用量（mg，X2）、司盤40的用量（mg，X3）。通過繪制等高線圖和效應面圖，確定最優(yōu)處方 X1=0.045，X2=0.20，X3=0.26，通過擬

8、合方程計算得到預測包封率為39.32%，載藥量為3.66%，而實際測得包封率為：（38.95±0.871）%，載藥量為：（3.60±0.025）%，與預測值偏差分別為：-0.940%和-1.630%。
　　第四部分：曲酸脂質體及囊泡的體外透皮特性研究
　　目的：考察曲酸脂質體、囊泡的體外經皮滲透特性，并與曲酸溶液進行比較。
　　方法：制備最優(yōu)處方的KA-L和 KA-N，確定合適的接收介質。利用改良 Franz透皮吸收擴

9、散儀對曲酸溶液（KA-S）、KA-L、KA-N三種制劑的體外透皮特性進行考察，分別記錄三種劑型的每小時透皮量，繪制累積透皮百分率-時間曲線，并計算24h累積透過量與皮膚滯留量，對釋放數據進行模型擬合，采用滯留時間法評價 KA-S、KA-L、KA-N的體外滲透特性，探究KA-S、KA-L、KA-N的體外透皮機制。
　　結果：體外透皮結果顯示，曲酸溶液（KA-S）24h的單位面積累積滲透量最大，為2.862 mg·cm-2，24h累積

10、釋放率已經達到90%，24h單位面積皮膚滯留量為0.233 mg·cm-2；KA-L的24h的單位面積累積滲透量較KA-S的少，為1.722 mg·cm-2，24h累積釋放率為54%，24h單位面積皮膚滯留量為0.746 mg·cm-2；KA-N的24h的單位面積累積滲透量為2.041 mg·cm-2，24h累積釋放率為71%，24h單位面積皮膚滯留量為0.534 mg·cm-2。體外經皮滲透曲線基本符合 Higuchi方程，實驗結果顯

11、示KA-L和KA-N相對于KA-S的24h透皮速率常數較小，表明KA-L和KA-N能夠起到較好的緩釋作用，其中KA-L的緩釋效果最好，同時KA-L和KA-N的24h皮膚滯留量相對于KA-S較大，表明兩種制劑可以使曲酸更多地滯留于皮下組織中。
　　第五部分：曲酸脂質體、囊泡穩(wěn)定性的初步考察
　　目的：初步考察曲酸脂質體、囊泡的穩(wěn)定性。
　　方法：進行影響因素實驗和長期穩(wěn)定性實驗，觀察曲酸脂質體和曲酸囊泡在不同溫度與光照條

12、件下的外觀改變，同時測定泄漏率，初步考察曲酸脂質體、囊泡的穩(wěn)定性。
　　結果：影響因素實驗和長期穩(wěn)定性實驗結果表明溫度與光照對脂質體和囊泡的泄漏率有一定的影響，光照對脂質體的外觀產生一定影響，而長時間的貯存則會加劇曲酸脂質體和囊泡的泄漏。
　　結論：建立的HPLC法可準確測定曲酸的含量，確立的微柱離心法和超速離心法能準確測定曲酸脂質體和囊泡的包封率。經單因素實驗與星點設計-效應面法優(yōu)選確定出的曲酸脂質體和囊泡的最優(yōu)處方、工藝