ASIC3在緩激肽B1受體激活引起炎性皮損區(qū)瘙癢反應中的作用研究.pdf

1、瘙癢是皮膚疾病和一些系統(tǒng)疾病的常見臨床癥狀之一，嚴重影響睡眠，降低患者生活質量。急性瘙癢主要由某些致癢物質引起的，慢性瘙癢主要由皮膚疾病和某些系統(tǒng)性疾病引起。臨床上治療瘙癢以傳統(tǒng)的抗組胺治療為主，但對于大多數的慢性瘙癢，效果往往不佳。瘙癢的發(fā)病機制至今不是很清楚，目前普遍認為瘙癢并不是由單一因素引起的，而是由致癢物質、皮膚神經纖維、角質形成細胞、皮膚屏障、外周中樞神經系統(tǒng)間的復雜相互作用的結果。
　　常用的完全弗氏佐劑(compl

2、ete Freund'S adjuvant，CFA)炎癥模型進行觸誘發(fā)癢實驗發(fā)現，炎癥皮損區(qū)出現癢覺敏化，并且緩激肽受體(bradykinin receptor，BR)在其中起到關鍵作用。緩激肽(bradykinin，BK)是目前已知的最強的致痛物質也是重要的致炎因子。緩激肽及其代謝產物des Arg(9)-bradykinin，des-Arg(10)-kallidin通過結合細胞膜上的特異性緩激肽受體發(fā)揮生物作用。緩激肽受體是一種九肽

3、段蛋白耦聯受體(G.protein.coupled receptor，GPCR)受體。正常生理情況下B1R除中樞神經系統(tǒng)組少量表達外其他組織幾乎不表達，而在細菌脂多糖(lipopolysaccharide，LPS)、炎癥、創(chuàng)傷等情況誘導下迅速表達，是一種誘導性表達受體。皮內注射B1R受體激動劑可引起CFA炎癥模型小鼠產生搔抓行為，但B1R受體激動劑引起瘙癢的下游機制至今不是很清楚。有研究指出機體炎癥，對應的背根神經節(jié)(dorsal ro

4、ot ganglion，DRG)酸敏感性離子通道(Acid-sensing ion channels，ASICs)表達上升，干皮癥小鼠ASIC3基因敲除或使用特異阻斷劑均可使搔抓行為減弱。B1R激動劑引起瘙癢是否與背根神經節(jié)上ASIC3表達增加有關值得進一步深入探討。
　　方法:
　　模型制備:C57BL/6J鼠七氟醚麻醉后頸背部皮膚剃毛，皮內注射CFA，96h后進行行為學觀察。實驗前置于Plexiglas盒內適應30min

5、，麻醉后腹腔預注射ASIC3阻斷劑APETx2，對照組腹腔注射生理鹽水，腹腔注射后立即放入Plexiglas盒內。30min后，于七氟醚麻醉后頸背部炎性皮損區(qū)皮內注射B1R激動劑，放入Plexiglas盒內觀察小鼠后肢搔抓藥物注射部位的次數，每只小鼠的觀察時間為30min。觀察結束后處死取相應節(jié)段DRG，western blot檢測DRG中ASIC3表達情況。
　　為進一步探討ASIC3參與瘙癢是否具有選擇性，本研究檢驗了APET

6、x2是否能抑制DCP模型小鼠自發(fā)癢以及急性致癢物質:氯喹(chloroquine，CQ)，內皮素-1（endothelin-1，ET-1）、48/80混合物(48/80compound)誘發(fā)的瘙癢。
　　結果:
　　1.抑制ASIC3通路顯著減弱小鼠B1R激動劑誘發(fā)的炎性皮損區(qū)瘙癢行為。
　　較對照組，實驗組腹腔預注射APETx2明顯減弱小鼠的搔抓行為(Fig1-1，*P＜0.05)，表明ASIC3參與B1R激動劑誘發(fā)

7、的瘙癢。
　　2.抑制ASIC3通路只能減弱某些致癢物質引起的瘙癢。
　　腹腔預注射APETx2明顯減弱氯喹引起的瘙癢（Fig2-2，*P＜0.05），但對48/80compound，ET-1引起的搔抓行為無明顯減弱作用（Fig2-2，*P＞0.05）.
　　3.抑制ASI3通路減弱DCP自發(fā)癢模型小鼠的搔抓行為。
　　實驗組腹腔注射APETx2小鼠30min內搔抓次數顯著較對照組減少(Fig2-1，*P＜0.0