離子束介導大豆DNA轉化羊柴的初步研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、羊柴是我國特有的優(yōu)良牧草之一,也是防風固沙,改良土壤,改變小氣候,改善自然生態(tài)環(huán)境的優(yōu)良物種。近些年來由于牲畜的增加,草場重牧,天然羊柴的數量越來越少,甚至在有些地方已經絕跡。利用基因工程對羊柴進行遺傳改良具有重要實踐意義。目前如何建立一種有效的、穩(wěn)定的組織培養(yǎng)體系和轉化系統(tǒng),已成為羊柴分子生物學研究和基因工程研究的關鍵技術。 本論文著重研究如何以羊柴成熟胚為外植體建立組織培養(yǎng)體系,并對影響羊柴愈傷誘導率的因素作了初步研究。實驗

2、結果表明:以MS為基本培養(yǎng)基,在愈傷誘導培養(yǎng)基中加入2,4-D利于愈傷組織的誘導;加入6-BA可以明顯改善愈傷組織的質量。最終確立誘導成熟胚愈傷組織的培養(yǎng)基為MS基本培養(yǎng)基附加2,4-D(2mol/L)和6-BA(1.5mg/L)。 本實驗針對重組質粒pBI121/Gy3上攜帶的Kan抗性基因,研究了抗生素的不同濃度對愈傷組織重量增長率的影響,確定了合適的抗生素篩選濃度為60mg/L,建立了有效的篩選體系。 在對離子注入

3、羊柴種子的研究過程中發(fā)現,離子能量對種子存活率有一定的影響,并通過研究羊柴種子的成活率和劑量的關系確定其轉化劑量范圍是800、900、1000×2.6×1013N+/cm2,通過實際轉化實驗確定最佳的轉化劑量為900×2.6×1013N+/cm2;對離子束注入后的羊柴愈傷組織進行失水率、愈傷組織重量增長倍數的統(tǒng)計以及細胞存活力的測定,確定了愈傷組織的轉化劑量范圍是100、150、200×2.6×1013N+/cm2,通過實際轉化實驗確定

4、最佳的轉化劑量為150×2.6×1013N+/cm2。在離子束介導轉化實驗中,用羊柴干種子和愈傷組織為受體,以GUS基因為篩選標記基因,目標基因為pBl121/Gy3,每個處理組注入約100個種子和20個愈傷組織,在誘導培養(yǎng)基中加入卡那霉素進行篩選,經一個月后得到抗性愈傷組織。GUS檢測結果顯示:干種子檢測到的GUS基因的瞬間表達率為13%。在活體組織注入后可以存活的前提下,通過對離子束介導質粒DNA導入羊柴愈傷組織的遺傳體系的研究,得

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