骨性關節(jié)炎患者外周血白細胞中糖相關基因表達分析.pdf

1、目的:總結骨性關節(jié)炎中醫(yī)現(xiàn)狀及基因組學研究進展，利用糖相關基因芯片技術比較骨性關節(jié)炎組與正常對照組之間外周血白細胞中糖基因轉錄水平的變化，研究骨性關節(jié)炎對外周血白細胞蛋白糖基化的影響，尋找與骨性關節(jié)炎相關的變化，探討骨性關節(jié)炎的分子機制，為骨性關節(jié)炎的檢測及治療提供幫助。
　　方法:選取15位骨性關節(jié)炎患者及15位健康志愿者，靜脈采血的方式抽取2.5ml外周血，制成外周血樣本保存，并將其分為骨性關節(jié)炎組和正常對照組。提取樣本RNA

2、，經定量后，檢測其完整性，熒光標記后與糖相關基因芯片雜交清洗。最后進行芯片掃描及數(shù)據(jù)的讀取與分析，篩選差異表達基因，進行實時熒光定量PCR驗證分析。
　　結果:提取的外周血白細胞RNA28S，及18S條帶完整，無明顯降解;38個差異表達基因中，骨性關節(jié)炎組上調表達的基因有18個，下調表達的基因有20個;基因芯片層聚類分析顯示，骨性關節(jié)炎組與正常對照組糖相關基因表達分布存在差異;RT-PCR結果顯示，糖相關基因芯片篩選出的6個差異表

3、達基因在10個骨性關節(jié)炎患者中表現(xiàn)出相同的差異表達趨勢;聚糖合成代謝通路分析顯示參與N-聚糖前體合成的DPM3和ALG8轉錄水平發(fā)生上調，GLB1和MAN2B1表達上調，O-聚糖合成方面，參與O聚糖Tn抗原(GalNAcα-Thr/Ser)合成的糖基轉移酶GALNT19和core2和core4結構合成的糖基轉移酶GCNT3表達同時上調，因此我們推測，O-聚糖core2和core4結構在骨性關節(jié)炎患者外周血白細胞中表達增加。
　　結

4、論:芯片數(shù)據(jù)經歸一化處理及分析，共篩選出38個差異表達基因，其中18個在骨性關節(jié)炎組中表達上調，20個在正常對照組中表達水平較高。應用實時定量RT-PCR對6個差異表達基因進行驗證，結果與芯片結果一致。通過對差異表達基因進行通路分析，骨關節(jié)炎外周血白細胞，硫酸化作用增高，糖鏈Galβ1-4GlcNAc降解作用增強，O-聚糖合成core2和core4結構增多，而這些變化可能與骨性關節(jié)炎造成的滑膜炎性物質釋放引起的免疫應答有關，從而導致關節(jié)