TXNIP對胰島β細胞衰老的影響及機制的初步研究.pdf

1、目的：探討TXNIP對胰島β細胞衰老的影響及TXNIP可能參與的影響衰老的信號通路，尋找潛在的胰島β細胞老化的治療靶點，為糖尿病的防治提供新思路。
　　方法：小鼠MIN6細胞通過穩(wěn)定轉(zhuǎn)染方法構(gòu)建TXNIP沉默（MIN6-KO）及過表達(MIN6-OE）的細胞株，空載質(zhì)粒（MIN6-GFP）為對照組。穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的細胞按常規(guī)方法進行培養(yǎng)，RT-PCR及western blot檢測不同代數(shù)沉默及過表達TXNIP后MIN6細胞中P16ink

2、4a、EZH2，TRX基因及蛋白的改變，流式細胞術檢測細胞周期，衰老相關-β-半乳糖苷酶染色檢測衰老細胞率，MTT法檢測細胞增殖，胰島素還原法檢測TRX活性。進一步檢測沉默TXNIP基因后高糖刺激下P38MAPK和ERK1/2及其磷酸化的變化,抑制劑PD169316、PD98059抑制信號通路后，觀察P38MAPK、ERK1/2蛋白磷酸化的變化及TXNIP、TRX、 P16ink4a、EZH2的變化情況。
　　結(jié)果：在MIN6細胞

3、中，隨傳代次數(shù)的增加 TXNIP的表達增加（P<0.05）。過表達 TXNIP后 P16ink4a表達增加（P<0.05），EZH2表達減少（P<0.05），TRX表達減少，活性降低（P<0.05）；細胞衰老明顯，細胞周期呈現(xiàn)G1→S期阻滯，增殖抑制。沉默TXNIP后MIN6細胞P16ink4a表達降低（P<0.05），TRX1表達升高,活性增加(P<0.05)，EZH2表達升高無統(tǒng)計學意義2（P>0.05）,并且沉默TXNIP后細胞增

4、殖增加，衰老延緩。高糖刺激下，沉默TXNIP的MIN6細胞較對照組P38MAPK磷酸化水平降低，ERK1/2磷酸化水平升高。P38MAPK通路抑制后，TXNIP、P16ink4a表達均降低，TRX、EZH2表達無明顯變化（P>0.05），但TRX活性升高（P<0.05）。抑制ERK1/2通路后，TXNIP、P16ink4a表達均升高（P<0.05）， EZH2表達降低（P<0.05）,TRX表達無明顯變化（P>0.05）,活性有降低趨勢

5、，但無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。
　　結(jié)論：TXNIP是胰島β細胞衰老的相關蛋白之一,參與了胰島β細胞衰老的調(diào)控。TXNIP表達上調(diào)可以促進胰島β細胞衰老，抑制增殖；減少TXNIP的表達可以減緩胰島β細胞的衰老，提高增殖速率。沉默TXNIP后可以抑制高糖刺激下P38MAPK通路的活化，促進ERK1/2的磷酸化。P38MAPK和ERK1/2信號通路是調(diào)節(jié)胰島β細胞中TXNIP與P16ink4a表達的信號通路，也可能是TXNIP介導