Th22、Th17細胞及其細胞因子在大鼠原位肝移植急性排斥反應模型的表達研究.pdf

1、穩(wěn)定的動物建模;在未應用任何免疫抑制劑情況下，Wistar大鼠與SD大鼠組合，可以建立穩(wěn)定的急性移植排斥模型。
　　第一部分 大鼠原位肝移植急性排斥模型的建立及評價
　　目的:掌握大鼠原位肝移植急性排斥反應的建模技術并評價其效果，總結手術技巧及方法，為后續(xù)試驗建立穩(wěn)定、有效的動物模型。
　　方法:分別以清潔級純系雄性Sprague-Dawley(SD)和Wistar大鼠為供體和受體，術前隨機分為對照組（假手術組）、同系

2、移植組（Wistar-Wistar）與異系移植組（SD-Wistar組），應用改良“二袖套法”建立大鼠原位肝移植模型36例。比較各組大鼠術后存活率及生存質量，HE染色(hematoxylin-eosin staining)觀察肝臟病理變化、酶聯(lián)免疫法(ELISA法)檢查血清內NO含量綜合評價肝移植急性排斥模型的效果。
　　結果:
　?、傥磻萌魏蚊庖咭种苿┑那闆r下，同系移植組大鼠共死亡1例，死因為手術出血和氣胸;異系移植組大

3、鼠術中死亡2例，均因肝下下腔靜脈吻合口出血;對照組大鼠沒有死亡，手術總成功率為91.7％(33/36);同系移植組大鼠術后14天存活率為100％，生存中位數(shù)為105天，異系移植組大鼠術后生存中位數(shù)為6天;
　?、谛g后第3天三組大鼠血液內NO含量差異顯著。異系移植組大鼠含量最高，為（306.67±14.36pg/ml），明顯高于對照組（60.77±13.66pg/ml）(P＜0.05）;同系移植組含量次之，為(139.83±15.5

4、3pg/ml)，低于異系移植組，但較對照組亦有明顯上升(P＜0.05);
　?、蹖φ战M大鼠肝組織結構正常，未見明顯炎癥細胞浸潤，為Williams標準0級;同系移植組大鼠肝臟組織結構完整，匯管區(qū)有較少炎癥細胞浸潤，肝小葉結構基本正常，為Williams標準0～1級;異系移植組大鼠肝細胞變性嚴重，肝血竇擴張充血明顯，細胞壞死嚴重;匯管區(qū)及中央靜脈周圍出現(xiàn)以淋巴細胞為主的炎性細胞浸潤，伴少數(shù)單核細胞，肝小葉結構紊亂，為Williams

5、標準3級。
　　結論:改良“二袖套法”可以簡化手術術式，顯著提高手術成功率，為下一步活體實驗提供。
　　第二部分 大鼠原位肝移植急性排斥模型中Th22、Th17細胞及相關因子的表達
　　目的:研究大鼠肝移植急性免疫排斥反應肝臟內Th22、Th17的細胞變化及其相關細胞因子白細胞介素-22、白細胞介素-17的表達，進一步探討其與肝移植急性排斥反應發(fā)生的關系。
　　方法:分別以清潔級純系雄性Sprague-Dawle

6、y(SD)和Wistar大鼠為供體和受體，應用改良“二袖套法”建立大鼠原位肝移植模型。分別采用流式細胞儀方法(flowcytometry;flow cytometer; FCM)檢測各組大鼠肝臟內Th22及Th17細胞數(shù)量變化;實時熒光定量逆轉錄-聚合酶鏈反應(Real time reverse transcription-Polymerise chainreactions; RT-qPCR)、蛋白質印跡法(Western blotti

7、ng，WB)檢測肝組織內IL-22及IL-17基因及蛋白的表達情況。
　　結果:大鼠肝移植急性免疫排斥模型建立成功;術后第7天異系移植組大鼠肝臟內Th22、Th17細胞數(shù)量分別為(2.85±0.95)和(3.56±0.93)，較同系移植組和對照組大鼠明顯升高(P＜0.05);肝細胞內IL-22及IL-17的基因及蛋白的表達水平均明顯高于同系移植組和對照組(P＜0.05)。
　　結論:Th22、Th17細胞及相關細胞因子均參與