Th22、Th17細(xì)胞及其細(xì)胞因子在大鼠原位肝移植急性排斥反應(yīng)模型的表達(dá)研究.pdf

1、穩(wěn)定的動(dòng)物建模;在未應(yīng)用任何免疫抑制劑情況下，Wistar大鼠與SD大鼠組合，可以建立穩(wěn)定的急性移植排斥模型。
　　第一部分 大鼠原位肝移植急性排斥模型的建立及評價(jià)
　　目的:掌握大鼠原位肝移植急性排斥反應(yīng)的建模技術(shù)并評價(jià)其效果，總結(jié)手術(shù)技巧及方法，為后續(xù)試驗(yàn)建立穩(wěn)定、有效的動(dòng)物模型。
　　方法:分別以清潔級純系雄性Sprague-Dawley(SD)和Wistar大鼠為供體和受體，術(shù)前隨機(jī)分為對照組（假手術(shù)組）、同系

2、移植組（Wistar-Wistar）與異系移植組（SD-Wistar組），應(yīng)用改良“二袖套法”建立大鼠原位肝移植模型36例。比較各組大鼠術(shù)后存活率及生存質(zhì)量，HE染色(hematoxylin-eosin staining)觀察肝臟病理變化、酶聯(lián)免疫法(ELISA法)檢查血清內(nèi)NO含量綜合評價(jià)肝移植急性排斥模型的效果。
　　結(jié)果:
　?、傥磻?yīng)用任何免疫抑制劑的情況下，同系移植組大鼠共死亡1例，死因?yàn)槭中g(shù)出血和氣胸;異系移植組大

3、鼠術(shù)中死亡2例，均因肝下下腔靜脈吻合口出血;對照組大鼠沒有死亡，手術(shù)總成功率為91.7％(33/36);同系移植組大鼠術(shù)后14天存活率為100％，生存中位數(shù)為105天，異系移植組大鼠術(shù)后生存中位數(shù)為6天;
　?、谛g(shù)后第3天三組大鼠血液內(nèi)NO含量差異顯著。異系移植組大鼠含量最高，為（306.67±14.36pg/ml），明顯高于對照組（60.77±13.66pg/ml）(P＜0.05）;同系移植組含量次之，為(139.83±15.5

4、3pg/ml)，低于異系移植組，但較對照組亦有明顯上升(P＜0.05);
　?、蹖φ战M大鼠肝組織結(jié)構(gòu)正常，未見明顯炎癥細(xì)胞浸潤，為Williams標(biāo)準(zhǔn)0級;同系移植組大鼠肝臟組織結(jié)構(gòu)完整，匯管區(qū)有較少炎癥細(xì)胞浸潤，肝小葉結(jié)構(gòu)基本正常，為Williams標(biāo)準(zhǔn)0～1級;異系移植組大鼠肝細(xì)胞變性嚴(yán)重，肝血竇擴(kuò)張充血明顯，細(xì)胞壞死嚴(yán)重;匯管區(qū)及中央靜脈周圍出現(xiàn)以淋巴細(xì)胞為主的炎性細(xì)胞浸潤，伴少數(shù)單核細(xì)胞，肝小葉結(jié)構(gòu)紊亂，為Williams

5、標(biāo)準(zhǔn)3級。
　　結(jié)論:改良“二袖套法”可以簡化手術(shù)術(shù)式，顯著提高手術(shù)成功率，為下一步活體實(shí)驗(yàn)提供。
　　第二部分 大鼠原位肝移植急性排斥模型中Th22、Th17細(xì)胞及相關(guān)因子的表達(dá)
　　目的:研究大鼠肝移植急性免疫排斥反應(yīng)肝臟內(nèi)Th22、Th17的細(xì)胞變化及其相關(guān)細(xì)胞因子白細(xì)胞介素-22、白細(xì)胞介素-17的表達(dá)，進(jìn)一步探討其與肝移植急性排斥反應(yīng)發(fā)生的關(guān)系。
　　方法:分別以清潔級純系雄性Sprague-Dawle

6、y(SD)和Wistar大鼠為供體和受體，應(yīng)用改良“二袖套法”建立大鼠原位肝移植模型。分別采用流式細(xì)胞儀方法(flowcytometry;flow cytometer; FCM)檢測各組大鼠肝臟內(nèi)Th22及Th17細(xì)胞數(shù)量變化;實(shí)時(shí)熒光定量逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)(Real time reverse transcription-Polymerise chainreactions; RT-qPCR)、蛋白質(zhì)印跡法(Western blotti

7、ng，WB)檢測肝組織內(nèi)IL-22及IL-17基因及蛋白的表達(dá)情況。
　　結(jié)果:大鼠肝移植急性免疫排斥模型建立成功;術(shù)后第7天異系移植組大鼠肝臟內(nèi)Th22、Th17細(xì)胞數(shù)量分別為(2.85±0.95)和(3.56±0.93)，較同系移植組和對照組大鼠明顯升高(P＜0.05);肝細(xì)胞內(nèi)IL-22及IL-17的基因及蛋白的表達(dá)水平均明顯高于同系移植組和對照組(P＜0.05)。
　　結(jié)論:Th22、Th17細(xì)胞及相關(guān)細(xì)胞因子均參與