曲美他嗪對抗大鼠急性低壓性缺氧損傷的機制研究.pdf

1、目的：急性高原?。ˋMS）是高原地區(qū)的特發(fā)病與常見病，是由于高原低氧環(huán)境所誘發(fā)的多組織器官的病理學改變及功能紊亂。研究表明，藥物防治手段可有效減少AMS的發(fā)病率和致死率。因此，本課題通過建立大鼠急性低壓性缺氧模型，模擬人體急進高原性低氧損傷，觀察曲美他嗪（Trimetazidin，TMZ）對急性高原缺氧誘發(fā)的心肌組織及腦組織損傷的保護作用，并探討其作用機制，以期為新型抗高原缺氧藥物的研發(fā)提供實驗依據(jù)。
　　方法：
　　1、實

2、驗動物分組：采用隨機數(shù)字表法，將72只雌性的SD大鼠隨機分作6個實驗組（每組12只），分別設立正常對照組（C）、急性低氧模型組（M）及高、中、低劑量TMZ給藥組（缺氧前灌胃給藥，TMZ濃度分別給予20mg/kg、10mg/kg、5mg/kg)、陽性藥物對照組（陽性藥設為尼莫地平，缺氧前灌胃給藥20mg/kg）。
　　2、急性低氧模型的建立：通過調控數(shù)字化低壓氧艙，模擬海拔7000米高原的大氣氧分壓，將各組大鼠置于低壓氧艙內進行缺氧

3、（正常對照組除外），持續(xù)低氧處理12h，建立大鼠急進高原性低氧損傷模型。
　　3、組織形態(tài)學觀察：低壓缺氧結束后，制備各組大鼠心肌組織及腦組織的石蠟包埋切片，通過蘇木素-伊紅（H.E）染色法，觀察各實驗組大鼠多組織、器官的形態(tài)學改變。
　　4、含水量的測定：低壓缺氧結束后，快速取出各組大鼠腦組織，采用干濕重質量差法，測定各實驗組大鼠腦含水量的變化，觀察TMZ對急性低壓缺氧大鼠腦水腫的影響。
　　5、血生化指標的檢測：低

4、壓缺氧結束后，快速抽取各組大鼠全血，低溫離心后分離血漿，利用放射免疫法測定大鼠血漿中心鈉素（ANP）和內皮素-1（ET-1）的含量，并通過化學比色法測定大鼠血漿中乳酸脫氫酶（LDH）的活性，觀察TMZ對大鼠急性低壓缺氧損傷的保護作用。
　　6、 RT-PCR技術檢測：低壓缺氧結束后，快速取出各組大鼠心肌組織與腦組織，置于液氮中保存，利用RT-PCR技術檢測各實驗組大鼠心肌組織與腦組織中水通道蛋白-1（AQP-1）、水通道蛋白-4（

5、AQP-4）在mRNA水平的表達情況。
　　7、 Western blot方法檢測：低壓缺氧結束后，快速取出各組大鼠心肌組織與腦組織，置于液氮中保存，利用Western Blot方法檢測各實驗組大鼠心肌組織與腦組織中水通道蛋白-1（AQP-1）、水通道蛋白-4（AQP-4）在蛋白水平的表達情況。
　　結果：
　　1、 H.E染色結果：與正常對照組相比，急性低氧模型組大鼠的心肌組織及腦組織均發(fā)生明顯的缺氧損傷；與模型組中

6、低氧損傷的大鼠相比，各劑量TMZ及陽性藥物尼莫地平均可顯著減輕急性低壓缺氧誘導的大鼠心肌組織及腦組織損傷的形態(tài)學改變。
　　2、腦含水量檢測結果：與正常對照組相比，急性低氧模型組大鼠的腦部含水量明顯增加（P<0.01）；與模型組中低氧損傷的大鼠相比，各劑量TMZ及陽性藥物尼莫地平均可顯著降低急性低壓缺氧誘導的大鼠腦含水量的增加（尼莫地平組P<0.05，高劑量TMZ組P<0.01，中、低劑量TMZ組P<0.05）。
　　3、血

7、生化指標檢測結果：與正常對照組相比，急性低氧模型組大鼠血漿中ANP及ET-1含量顯著增加（P<0.01），LDH活性顯著升高（P<0.01）；與模型組中低氧損傷的大鼠相比，各劑量TMZ及陽性藥物尼莫地平均可顯著減少急性低壓缺氧后大鼠血漿中ANP及ET-1的含量（尼莫地平組、各劑量TMZ組P<0.01），降低大鼠血漿中LDH活性（尼莫地平組、高劑量TMZ組P<0.01，中、低劑量TMZ組P<0.05）。
　　4、 RT-PCR檢測結

8、果：與正常對照組相比，急性低氧模型組大鼠的心肌及腦組織中AQP-1、AQP-4在mRNA水平的表達均顯著升高（P<0.01）；與模型組中低氧損傷的大鼠相比，各劑量TMZ及陽性藥物尼莫地平均可顯著降低急性低壓缺氧后大鼠心肌及腦組織中AQP-1、AQP-4在mRNA水平的表達（其中心肌AQP-1/4 mRNA：尼莫地平組、各劑量TMZ組， P<0.01；腦組織AQP-1 mRNA：尼莫地平組、高、中劑量TMZ組，P<0.01；腦組織AQP-

9、4 mRNA：尼莫地平組、各劑量TMZ組，P<0.01）。
　　5、 Western blot檢測結果：與正常對照組相比，急性低氧模型組大鼠的心肌及腦組織中 AQP-1、AQP-4在蛋白水平的表達均顯著升高（P<0.01）；與模型組中低氧損傷的大鼠相比，各劑量 TMZ及陽性藥物尼莫地平均可顯著降低急性低壓缺氧后大鼠心肌及腦組織中 AQP-1、AQP-4在蛋白水平的表達（尼莫地平組、各劑量TMZ組，P<0.01）。
　　結論：