miRNAs在肝癌中的表達及臨床意義.pdf

1、目的:通過比較miRNAs在具有不同轉移能力的肝癌細胞株MHCC97-H（高轉移）和MHCC97-L（低轉移）中的表達差異，分析miRNAs與肝癌生物學特征的相關性及其在肝癌中表達的臨床意義，從而為進一步提高肝癌的診斷及治療效果提供新的策略及依據(jù)。
　　方法:
　　(1)RNAs芯片技術對具有不同轉移能力的細胞株MHCC97-H（高轉移）和MHCC97-L（低轉移）中的miRNAs的表達情況進行分析，找出差異表達miRNAs

2、，應用qRT-PCR技術在人肝癌高低轉移細胞株及肝癌和癌旁組織中驗證基因芯片的結果，初步探討miRNAs在肝癌中的表達及臨床意義。
　　(2)應用靶基因預測網(wǎng)站對差異表達的miRNAs的靶基因進行預測，根據(jù)預測結果選取差異的miRNAs進行進一步的研究。
　　(3)分別上調和下調所選取的miRNAs的表達水平，利用體內、外實驗檢測改變前后肝癌細胞的生物學行為，進一步探討miRNAs在肝癌中表達的臨床意義。
　　(4)干

3、擾和過表達miRNAs的靶基因，改變其在肝癌細胞中的表達水平，體內、外實驗檢測改變前后肝癌細胞的生物學行為，明確miRNAs影響肝癌轉移的機制。
　　結果:
　　(1)有13個miRNAs在轉移能力不同的肝癌細胞株中的表達存在差異，應用qRT-PCR技術對肝癌及其相鄰的癌旁組織中miRNAs的進行檢測所得結果與在細胞株檢測的結果基本一致。
　　(2)基因預測網(wǎng)站預測miR-26a-2-3p，miR-5481和miR-3

4、4a-5p具有共同的靶基因ST3GAL5，熒光素酶實驗對預測結果進行了證實。
　　(3)上調miR-26a-2-3p，miR-5481和miR-34a-5p的表達水平能夠降低 MHCC97-H細胞的增殖活性，集落形成數(shù)量，侵襲能力及體內成瘤性，下調miR-26a-2-3p，miR-5481和miR-34a-5的表達水平則增強MHCC97-L細胞的增殖活性，集落形成數(shù)量，侵襲能力及體內成瘤性。
　　(4)上調ST3GAL5的表

5、達水平增強MHCC97-L細胞的侵襲能力及體內成瘤性，干擾ST3GAL5的表達水平能夠降低MHCC97-H細胞的侵襲能力及體內成瘤性。
　　結論:
　　(1)miRNAs在轉移能力不同的肝癌細胞株中存在差異的表達，miR-26a-2-3p，miR-5481和miR-34a-5p與肝癌的侵襲能力呈負相關。
　　(2)miR-26a-2-3p，miR-5481和miR-34a-5p可能通過負向性調控糖基因ST3GAL5的表