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文檔簡介
1、目的:
以LPS誘導人臍靜脈內(nèi)皮細胞(human umbilical vein endothelial cells, HUVECs),構(gòu)建血管內(nèi)皮細胞炎癥損傷模型,研究小檗堿對HUVECs和人急性單核細胞白血病細胞( human acute monocytic leukemia cell line,THP-1)之間黏附的影響,并探討其作用機制是否與ACE2-Ang(1-7)-Mas軸相關。
方法:
1.用不
2、同濃度LPS誘導HUVECs細胞損傷不同時間,以單核細胞黏附實驗觀察THP-1與HUVECs細胞之間黏附的改變,確立構(gòu)建血管內(nèi)皮細胞炎癥損傷模型的最佳條件,并以CCK-8法檢測不同濃度小檗堿對HUVECs細胞的毒性;
2.分別用0,2.5,5,10μM小檗堿和1000ng/ml LPS共處理HUVECs細胞,以單核細胞黏附實驗、ELISA法觀察小檗堿對血管內(nèi)皮細胞炎癥損傷模型中HUVECs與THP-1細胞間的黏附、趨化因子MC
3、P-1以及炎癥因子IL-1β的影響;
3.分別用0,2.5,5,10μM小檗堿和1000ng/ml LPS共處理HUVECs細胞,以RT-PCR法和Western blot法觀察小檗堿對HUVECs細胞中ACE2、MAS表達的影響,以 ELISA法觀察小檗堿對其相關代謝物Ang1-7、AngⅡ含量的影響;
4.分別經(jīng)或不經(jīng)1000ng/ml LPS、10μM小檗堿、10μM A779處理HUVECs細胞,以 RT-P
4、CR法和 ELISA法觀察小檗堿對黏附分子ICAM-1與VCAM-1表達的影響及其與ACE2-Ang1-7-Mas軸的相關性。
結(jié)果:
1.不同濃度LPS處理HUVECs細胞不同時間,單核細胞黏附實驗可見黏附在血管內(nèi)皮細胞上的THP-1數(shù)量呈時間和劑量依賴性顯著增加(P<0.01),于1000ng/ml LPS處理24h時達最大效應;且CCK-8法檢測得出當C小檗堿≦10μM時,幾乎不影響HUVECs細胞活性。
5、> 2.不同濃度小檗堿處理HUVECs細胞后,單核細胞黏附實驗可見黏附在血管內(nèi)皮細胞上的 THP-1數(shù)量呈劑量依賴性顯著減少( P<0.01),且炎癥因子 IL-1β、趨化因子 MCP-1含量均顯著減少(P<0.01)。
3.與對照組比較,模型組ACE2、Mas表達水平及Ang1-7含量均顯著降低(P<0.01),AngⅡ含量則顯著升高(P<0.01);與模型組比較,小檗堿處理組 ACE2表達及 Ang1-7含量均顯著升高(
6、P<0.01),AngⅡ含量顯著降低(P<0.05),Mas基因表達無明顯變化(P>0.05)。
4.與對照組比較,模型組黏附分子 ICAM-1、VCAM-1表達均顯著升高(P<0.01);與模型組比較,小檗堿處理組 ICAM-1、VCAM-1表達顯著均降低(P<0.01,P<0.05);與小檗堿處理組比較,A779阻斷組 ICAM-1表達顯著升高( P<0.05), VCAM-1表達無明顯變化(P>0.05)。
結(jié)
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