小檗堿對血管內(nèi)皮細(xì)胞黏附的影響及其與ACE2-Ang(1-7)-Mas軸相關(guān)性研究.pdf

1、目的：
　　以LPS誘導(dǎo)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞（human umbilical vein endothelial cells， HUVECs），構(gòu)建血管內(nèi)皮細(xì)胞炎癥損傷模型，研究小檗堿對HUVECs和人急性單核細(xì)胞白血病細(xì)胞（ human acute monocytic leukemia cell line，THP-1）之間黏附的影響，并探討其作用機(jī)制是否與ACE2-Ang(1-7)-Mas軸相關(guān)。
　　方法：
　　1.用不

2、同濃度LPS誘導(dǎo)HUVECs細(xì)胞損傷不同時(shí)間，以單核細(xì)胞黏附實(shí)驗(yàn)觀察THP-1與HUVECs細(xì)胞之間黏附的改變，確立構(gòu)建血管內(nèi)皮細(xì)胞炎癥損傷模型的最佳條件，并以CCK-8法檢測不同濃度小檗堿對HUVECs細(xì)胞的毒性；
　　2.分別用0，2.5，5，10μM小檗堿和1000ng/ml LPS共處理HUVECs細(xì)胞，以單核細(xì)胞黏附實(shí)驗(yàn)、ELISA法觀察小檗堿對血管內(nèi)皮細(xì)胞炎癥損傷模型中HUVECs與THP-1細(xì)胞間的黏附、趨化因子MC

3、P-1以及炎癥因子IL-1β的影響；
　　3.分別用0，2.5，5，10μM小檗堿和1000ng/ml LPS共處理HUVECs細(xì)胞，以RT-PCR法和Western blot法觀察小檗堿對HUVECs細(xì)胞中ACE2、MAS表達(dá)的影響，以 ELISA法觀察小檗堿對其相關(guān)代謝物Ang1-7、AngⅡ含量的影響；
　　4.分別經(jīng)或不經(jīng)1000ng/ml LPS、10μM小檗堿、10μM A779處理HUVECs細(xì)胞，以 RT-P

4、CR法和 ELISA法觀察小檗堿對黏附分子ICAM-1與VCAM-1表達(dá)的影響及其與ACE2-Ang1-7-Mas軸的相關(guān)性。
　　結(jié)果：
　　1.不同濃度LPS處理HUVECs細(xì)胞不同時(shí)間，單核細(xì)胞黏附實(shí)驗(yàn)可見黏附在血管內(nèi)皮細(xì)胞上的THP-1數(shù)量呈時(shí)間和劑量依賴性顯著增加（P<0.01），于1000ng/ml LPS處理24h時(shí)達(dá)最大效應(yīng)；且CCK-8法檢測得出當(dāng)C小檗堿≦10μM時(shí)，幾乎不影響HUVECs細(xì)胞活性。

5、>　　2.不同濃度小檗堿處理HUVECs細(xì)胞后，單核細(xì)胞黏附實(shí)驗(yàn)可見黏附在血管內(nèi)皮細(xì)胞上的 THP-1數(shù)量呈劑量依賴性顯著減少（ P<0.01），且炎癥因子 IL-1β、趨化因子 MCP-1含量均顯著減少（P<0.01）。
　　3.與對照組比較，模型組ACE2、Mas表達(dá)水平及Ang1-7含量均顯著降低（P<0.01），AngⅡ含量則顯著升高（P<0.01）；與模型組比較，小檗堿處理組 ACE2表達(dá)及 Ang1-7含量均顯著升高（

6、P<0.01），AngⅡ含量顯著降低（P<0.05），Mas基因表達(dá)無明顯變化（P>0.05）。
　　4.與對照組比較，模型組黏附分子 ICAM-1、VCAM-1表達(dá)均顯著升高（P<0.01）；與模型組比較，小檗堿處理組 ICAM-1、VCAM-1表達(dá)顯著均降低（P<0.01，P<0.05）；與小檗堿處理組比較，A779阻斷組 ICAM-1表達(dá)顯著升高（ P<0.05）， VCAM-1表達(dá)無明顯變化（P>0.05）。
　　結(jié)