乙?；汪燃谆堁廴舛嗵堑闹苽浼捌淇寡趸兔庖哒{節(jié)活性的研究.pdf

1、目的：研究乙?；堁廴舛嗵呛汪燃谆堁廴舛嗵堑淖罴阎苽涔に?。研究龍眼肉多糖、乙酰化龍眼肉多糖和羧甲基化龍眼肉多糖在體外的抗氧化作用，并采用體內、外試驗法研究龍眼肉多糖乙?；汪燃谆苌锏拿庖呋钚?，闡述龍眼肉多糖及其衍生物的抗氧化和免疫調節(jié)機制，為龍眼肉多糖的產業(yè)開發(fā)提供科學依據。
　　方法：1.采取水提醇沉法從龍眼肉中獲取龍眼肉粗多糖，蛋白酶解法脫去蛋白質，H2O2氧化法脫去色素，透析法去除小分子物質，并用苯酚-硫酸法測定龍

2、眼肉粗多糖中的糖含量。2. DEAE-52纖維素層析柱和Sephacryl S-300 HR層析柱對除雜后的龍眼肉多糖進一步純化，獲取均一多糖組分LYP2。3.選取乙酸酐作為乙?；噭┲苽湟阴；堁廴舛嗵牵ˋc-LYP2），以Ac-LYP2的取代度（DS）為指標，使用響應面分析法優(yōu)化Ac-LYP2的制備工藝。4.在氫氧化鈉-一氯乙酸（MCA）體系下制備羧甲基化龍眼肉多糖（CM-LYP2），以CM-LYP2的DS為指標，使用響應面分析法優(yōu)

3、化CM-LYP2的制備工藝。5.測定Ac-LYP2和CM-LYP2的總還原能力，對羥基自由基（·OH）和超氧陰離子（O2·-）清除效果；考察Ac-LYP2和CM-LYP2在體外對小鼠肝臟脂質過氧化的抑制作用以及H2O2誘導的紅細胞溶血的保護作用。6.利用環(huán)磷酰胺腹腔注射小鼠制備免疫抑制模型，研究Ac-LYP2和CM-LYP2對免疫抑制小鼠免疫系統的保護作用，在試驗過程中采用脾臟指數（SI，Spleen Index）觀察Ac-LYP2和C

4、M-LYP2對免疫抑制小鼠免疫器官的影響；通過建立小鼠遲發(fā)型變態(tài)反應模型并根據耳腫脹程度來評價小鼠的細胞免疫功能；通過檢測小鼠血清中的溶血素含量評價其體液免疫功能；通過檢測小鼠血清和脾臟中的溶菌酶含量來評價小鼠的非特異性免疫功能。檢測血清INF-γ和IL-4含量評價Ac-LYP2和CM-LYP2對Th1/Th2免疫應答模式的影響。7.研究Ac-LYP2和CM-LYP2的體外免疫調節(jié)活性，從脾臟增殖能力、巨噬細胞吞噬能力、NO和細胞因子分

5、泌功能等方面進行了體外實驗，綜合評價Ac-LYP2和CM-LYP2對免疫功能的調節(jié)作用。
　　結果：1.水提醇沉法提取的龍眼肉多糖得率為7.22％，龍眼肉粗多糖中的糖含量達到67.85%；木瓜蛋白酶法測定的蛋白清除率為71.58%；從0.125 mol/L NaCl流分中得到均一多糖組分LYP2。2.龍眼肉多糖乙?；罴押铣晒に嚍椋阂宜狒篖YP2=10.2:1，反應溫度42℃，反應時間30 min。該反應條件下合成的乙?；堁廴?/p>

6、多糖的DS達到0.443。3.對LYP2進行羧甲基化修飾的最佳制備工藝為：MCA濃度1.2 mol/L，反應溫度73℃，反應時間3.2 h。根據該制備工藝得到的羧甲基化龍眼肉多糖的DS約為1.053。4. LYP2，Ac-LYP2和CM-LYP2均具有不同程度的清除自由基能力、抑制脂質過氧化能力及對過氧化氫損傷細胞的保護能力。LYP2，Ac-LYP2和CM-LYP2清除羥基自由基的半數清除濃度（EC50）分別為5507.67μg/mL（

7、4.67×10-5 mol/L）、702.41μg/mL（5.45×10-6 mol/L）和519.39μg/mL（3.44×10-6 mol/L）；LYP2，Ac-LYP2和CM-LYP2清除超氧陰離子自由基的EC50分別為2219.05μg/mL（1.88×10-5 mol/L）、977.12μg/mL（7.57×10-6 mol/L）和489.70μg/mL（3.24×10-6 mol/L）；LYP2，Ac-LYP2和CM-LYP

8、2抑制小鼠肝臟脂質過氧化的半數抑制濃度（IC50）分別為917.99μg/mL（7.78×10-6 mol/L）、646.04μg/mL（5.01×10-6 mol/L）和544.21μg/mL（3.60×10-6 mol/L）；LYP2，Ac-LYP2和CM-LYP2抑制H2O2誘導的紅細胞溶血的IC50分別為620.82μg/mL（5.26×10-6 mol/L）、380.11μg/mL（2.95×10-6 mol/L）和262.7

9、6μg/mL（1.74×10-6 mol/L）；5.在20~160 mg/kg范圍內，LYP2，Ac-LYP2和CM-LYP2均能在一定程度上提高免疫抑制小鼠的脾臟指數，顯著提高免疫抑制小鼠耳腫脹度、同時顯著升高半數溶血值（HC50）、血清中IL-4含量和溶菌酶含量，降低血清中IFN-γ含量，并且相同濃度下，Ac-LYP2和CM-LYP2表現出的免疫效應更強。6.三個多糖組分協同脂多糖（LPS）促進B淋巴細胞增殖的強弱順序為：CM-LY

10、P2> LYP2> Ac-LYP2，而協同刀豆蛋白（Con A）促進T淋巴細胞增殖的強弱順序為：Ac-LYP2> LYP2> CM-LYP2。LYP2、Ac-LYP2和CM-LYP2均能協同LPS顯著地增強巨噬細胞的吞噬能力，且表現出一定的量效關系。其活性強弱順序依次為：Ac-LYP2> CM-LYP2>LYP2。LYP2、Ac-LYP2和CM-LYP2可以促進小鼠腹腔巨噬細胞分泌NO和細胞因子IL-1β、TNF-α、IL-12p40。

11、
　　結論：1.乙酸酐法優(yōu)選的乙酰化龍眼肉多糖合成工藝穩(wěn)定可行，是一種合成多糖乙酰化衍生物比較理想的方法。2.采用氫氧化鈉-MCA體系制備多糖羧甲基衍生物簡單易行、穩(wěn)定可控，是一種比較理想的化學修飾方法。3.乙?；汪燃谆囊胗欣谔岣啐堁廴舛嗵堑目寡趸芰?，從質量濃度角度考慮，Ac-LYP2和CM-LYP2的抗氧化能力弱于維生素C，若從物質的量濃度考慮，維生素C的抗氧化能力不及Ac-LYP2和CM-LYP2。4. LYP2、A