他克莫司緩解大鼠自體移植靜脈橋內(nèi)膜增生的研究.pdf

1、目的：冠狀動脈疾?。–AD）是冠狀動脈粥樣硬化斑塊病理性聚集于冠脈管腔，導致其變狹窄后堵塞的一種疾病。冠脈血流恢復越早越可能對心肌功能恢復產(chǎn)生至關(guān)重要作用。目前治療的主要外科手段是用自體血管繞過堵塞的血管段形成旁路，即冠脈搭橋術(shù)（CABG）。人大隱靜脈（SV）一直被用作主要移植血管，因為其對大多數(shù)患者而言不是不可或缺，容易工作，容易采集，管腔巨大等。而其主要缺點是較低的通暢率。目前針對移植失敗有不少治療方法，比如No-touch技術(shù)，內(nèi)

2、窺鏡靜脈采集，使用抗血小板藥物，基因治療等。但靜脈橋的中遠期通暢率并無明顯改變。故如何提高中遠期通暢率成為了研究熱點。本研究將通過細胞實驗和動物實驗來探討他克莫司是否能抑制大鼠自體靜脈移植術(shù)后靜脈橋內(nèi)膜增生，為藥物治療CABG術(shù)后再狹窄提供參考。
　　方法：隨機選用健康雄性SD（Sprague-Dawley）大鼠28只，體重200-240g。隨機分為他克莫司實驗組（n=14）和安慰劑對照組（n=14）。實驗組給以他克莫司(0.2m

3、g/kg)肌注，對照組肌注相同體積生理鹽水，每天1次，持續(xù)1周。處理完畢后行自體右頸外靜脈-頸總動脈移植術(shù)，術(shù)后繼續(xù)原方案干預。于術(shù)后第2周和第4周處死大鼠，采集靜脈橋。制備組織病理切片，應用計算機圖像分析軟件測量新生內(nèi)膜厚度；提取組織蛋白，蛋白印跡技術(shù)（Western Blot）技術(shù)檢測p27蛋白表達情況。體外細胞實驗部分：培養(yǎng)人大隱靜脈平滑肌細胞。增殖實驗按：1、實驗組A（0.4nmol·L-1他克莫司），2、實驗組B（4nmol·

4、L-1他克莫司），3、實驗組C（40nmol·L-1他克莫司），4、實驗組D（400nmol·L-1他克莫司），5、實驗組E（4000nmol·L-1他克莫司），6、對照組（等量PBS）。干預4天后，MTT法檢測細胞增殖情況。遷移實驗按：1、實驗組A（2nmol·L-1他克莫司+PDGF-bb），2、實驗組B（20nmol·L-1他克莫司+PDGF-bb），3、實驗組C（200nmol·L-1他克莫司+PDGF-bb），4、實驗組D（2

5、000nmol·L-1他克莫司+PDGF-bb），5、對照組（等量PBS+PDGF-bb），干預24小時，Transwell小室法檢測細胞遷移情況。
　　結(jié)果：大鼠自體頸外靜脈-頸總動脈移植術(shù)后，第2周時，新生內(nèi)膜厚度比較，第2周時新生內(nèi)膜厚度比較，他克莫司實驗組明顯小于對照組[（20.56±4.55）μm VS（28.35±5.86）μm,P＜0.05]。第4周時，他克莫司實驗組仍明顯小于對照組[（36.22±6.33）μm V

6、S（62.13±7.60）μm,P＜0.01]。Western Blot檢測發(fā)現(xiàn)術(shù)后2周新生內(nèi)膜中p27蛋白表達明顯高于對照組（P＜0.05）,4周更為顯著。細胞增殖實驗中，培養(yǎng)4天后，相比對照組，實驗組A組的抑制率為8％，B組抑制率為19%，C組抑制率為38%，D組抑制率為61%，E組抑制率為99%。差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。細胞遷移實驗中，干預24小時后，加入他克莫司組的遷移細胞數(shù)均小于對照組，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.01