丹參酮ⅡA對(duì)慢性間歇性低氧所致高血壓大鼠心肌ET-1及其受體的影響.pdf

1、阻塞性睡眠呼吸暫停綜合征（Obstructive Sleep Apnea Syndrome, OSAS）是一種常見(jiàn)的睡眠呼吸障礙性疾病，其臨床主要特征為夜間打鼾并伴有呼吸暫停，從而導(dǎo)致患者睡眠結(jié)構(gòu)出現(xiàn)紊亂、長(zhǎng)期動(dòng)脈血氧飽和度的波動(dòng)，進(jìn)而出現(xiàn)慢性間歇性低氧（ Chronic Intermittent Hypoxia，CIH），最終引起身體的多個(gè)系統(tǒng)產(chǎn)生綜合性損傷。OSAS患者一般采用藥物干預(yù)治療、口腔矯治器治療、呼吸機(jī)持續(xù)氣道正壓通氣（C

2、PAP）治療以及外科手術(shù)治療等，但到目前為止，在臨床上還缺乏一種有效的治療方法可以治愈該疾病。
　　丹參酮IIA（Tanshinone IIA, Tan IIA）是一種從丹參中分離的二萜醌類化合物。它是一種有效的脂溶性單體，具有縮小心肌梗死面積及抗動(dòng)脈粥樣硬化的作用，從而降低心肌耗氧量。此外，Tan IIA對(duì)血小板的聚集和血液凝固有抑制作用，可擴(kuò)大冠狀動(dòng)脈、增加血流量，改善缺氧誘導(dǎo)的心肌代謝紊亂及心功能，從而改善心肌缺氧的耐受性。

3、另外，Tan IIA還具有抗炎抗氧化的作用。
　　另外，OSAS患者血壓升高與內(nèi)皮素-1（Endothelin-1, ET-1）水平升高密切相關(guān)。ET-1是由內(nèi)皮細(xì)胞上合成一種強(qiáng)力的血管收縮肽，需與ETA或ETB受體結(jié)合后才能發(fā)揮作用。近來(lái)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)證實(shí)了Tan IIA對(duì)ET-1的合成有抑制作用，并在某種程度上表現(xiàn)出了ET-1受體拮抗劑的效果，從而改善血管內(nèi)皮功能障礙。此外，Tan IIA可以通過(guò)調(diào)節(jié)心肌細(xì)胞凋亡的基因表達(dá)從而抑制左

4、心室肥厚的發(fā)生這對(duì)心臟有一定的保護(hù)作用。
　　雖然，目前關(guān)于Tan IIA在保護(hù)內(nèi)皮細(xì)胞功能和心功能方面研究眾多，但是在保護(hù)由 CIH引起的血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷以及心功能損傷的分子機(jī)制至今尚未十分清楚，也并未發(fā)現(xiàn)有關(guān)Tan IIA對(duì)CIH介導(dǎo)的ET-1及其受體的表達(dá)的信號(hào)通路方面的研究報(bào)道。
　　本研究就是探討Tan IIA對(duì)CIH大鼠心肌ET-1及其受體的影響，進(jìn)一步探討Tan IIA在治療OSAS患者過(guò)程中的作用機(jī)制。

5、>　　目的：本課題擬從研究與CIH相關(guān)ET-1及其受體拮抗劑的熱點(diǎn)問(wèn)題著手，探討Tan IIA對(duì)CIH誘導(dǎo)的高血壓大鼠心功能的調(diào)節(jié)作用和心肌損傷的保護(hù)作用，以期明確Tan IIA調(diào)節(jié)CIH的相關(guān)性作用機(jī)制。
　　方法：雄性SD(Sprague~Dawley)大鼠（體重為180~220 g，由河北醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供），隨機(jī)分成3組：常氧組（n=16）：暴露于常氧環(huán)境中飼養(yǎng)；CIH組（n=16）：暴露于 CIH環(huán)境中飼養(yǎng)；CIH

6、+Tan IIA組（n=16）：暴露于CIH環(huán)境中同時(shí)腹腔注射丹參酮IIA磺酸鈉（20 mg/kg）進(jìn)行干預(yù)。將CIH組和CIH+Tan IIA組大鼠暴露于慢性間歇性低氧倉(cāng)內(nèi)，并將系統(tǒng)設(shè)定為每一次低氧及復(fù)氧的循環(huán)時(shí)間為3 min，前1.5 min充入N2使倉(cāng)內(nèi)氧濃度降至9％，后1.5 min充入純O2使倉(cāng)內(nèi)氧濃度恢復(fù)到21%。每天暴露8 h共3周。造模結(jié)束后，將大鼠隨機(jī)用于實(shí)驗(yàn)的不同部分。
　　在造模前一天17時(shí)進(jìn)行大鼠尾動(dòng)脈無(wú)創(chuàng)

7、血壓測(cè)量，待造模以后對(duì)每組大鼠進(jìn)行血壓測(cè)量，記錄每只大鼠尾動(dòng)脈收縮壓。在造模結(jié)束斷水?dāng)嗉Z12 h后，利用目?jī)?nèi)眥取血，用于血液各項(xiàng)指標(biāo)的檢測(cè)。隨后給予烏拉坦（5 mg/kg）腹腔注射麻醉，分離右頸總動(dòng)脈，將提前準(zhǔn)備好的靜脈套管針（內(nèi)徑0.8 mm）中充入用生理鹽水配制的0.3%的肝素，并且與壓力換能器和多道生理信號(hào)采集系統(tǒng)連接，小心地插入動(dòng)脈內(nèi)，在此過(guò)程中將采集到的數(shù)據(jù)錄入計(jì)算機(jī)。然后緩慢沿頸動(dòng)脈繼續(xù)插管入左心室，當(dāng)采集系統(tǒng)顯示出左室波型

8、后即停止繼續(xù)推入，待波形穩(wěn)定20 min后記錄的心率HR（Heart rate）、左室收縮內(nèi)壓LVSP（Left Ventricular Systolic Pressure）、左心室舒張末壓LVEDP（Left Ventricular End Diastolic Pressure）、左心室最大收縮和舒張速率 LV±dp/dtmax（ Maximum ascending and descending rate of Left Ventri

9、cular Pressure）。記錄上述指標(biāo)之后，對(duì)常氧組大鼠和CIH組大鼠（n=8）再次進(jìn)行股靜脈穿刺給藥ET-1（0.03 nmol/kg），記錄LVSP的最大值；當(dāng)LVSP值恢復(fù)到給藥前水平10 min后，對(duì)兩組給予丹參酮IIA（10 mg/kg）作用20 min后，再次給藥ET-1（0.03 nmol/kg），讀取LVSP的最大值，并計(jì)算出給藥前后ET-1誘導(dǎo)收縮的最大變化率，進(jìn)而對(duì)左心室功能進(jìn)行評(píng)價(jià)。此外，對(duì)大鼠進(jìn)行解剖，稱量

10、左心室重量，計(jì)算得出左心室重量指數(shù) LVWI（Left Ventricular Weight Index）。同時(shí)，一部分用多聚甲醛固定，一部分放入~80°C冰箱凍存，備用。本研究中利用蘇木精~伊紅染色法（Hematoxylin~eosin Staining, HE染色）觀察心臟的損傷程度以及給予Tan IIA干預(yù)后心臟組織的變化，同時(shí)采用免疫組化和蛋白質(zhì)印跡法(Western blot)檢測(cè) ET-1以及其受體的蛋白表達(dá)，另外，還觀察T

11、an IIA對(duì) CIH引起的一氧化氮（Nitric Oxide, NO）釋放的調(diào)節(jié)以及內(nèi)皮型一氧化氮合酶(endothelial Nitric Oxide Synthase, eNOS)蛋白表達(dá)的影響。
　　結(jié)果：
　　1丹參酮IIA對(duì)CIH大鼠尾動(dòng)脈壓的影響
　　造模3周后，與常氧組比較，CIH組大鼠尾動(dòng)脈壓（149±4 mmHg）明顯升高（P<0.05）；與CIH組比較，CIH+Tan IIA組大鼠尾動(dòng)脈壓（119

12、±3 mmHg）明顯降低（P<0.05）。
　　2丹參酮IIA對(duì)CIH大鼠體重 BW及心臟重量指數(shù) HWI、左心室重量指數(shù) LVWI的影響
　　與常氧組比較，CIH組大鼠體重（313±10 g）明顯降低（P<0.05）；與CIH組比較，CIH+Tan IIA組大鼠體重（331±8 g）未見(jiàn)差異。常氧組、CIH組、CIH+Tan IIA組大鼠的 HWI（3.14±0.05,3.08±0.07,3.06±0.08 mg/g）和

13、LVWI（2.06±0.09,1.98±0.08,2.08±0.11 mg/g）未見(jiàn)差異。
　　3丹參酮IIA對(duì) CIH大鼠血流動(dòng)力學(xué)的影響
　　與常氧組相比，CIH組大鼠的 LVSP、±dp/dtmax均明顯升高（P<0.05）；與 CIH組比較，CIH+Tan IIA組大鼠 LVSP、±dp/dtmax均明顯降低（P<0.05）。
　　4 ET-1和丹參酮IIA對(duì) CIH大鼠 LVSP的影響
　　采用股靜脈注

14、射給予ET-1后，常氧組和 CIH組大鼠 LVSP均顯著升高（P<0.05）；與常氧組比較，CIH組大鼠的LVSP變化率明顯增高（P<0.05）；經(jīng)丹參酮 IIA干預(yù)后再次注射 ET-1，兩組大鼠LVSP均顯著降低（P<0.05），與常氧組相比，CIH大鼠 LVSP變化率顯著增加（P<0.01）。
　　5丹參酮IIA對(duì)CIH大鼠心肌組織形態(tài)學(xué)改變的影響
　　通過(guò)HE染色可觀察到，常氧組心肌細(xì)胞排列整齊且紋理清晰，心肌細(xì)胞呈桿

15、狀排列，核染色質(zhì)分布均勻；CIH組心肌細(xì)胞排列紊亂，心肌細(xì)胞核收縮變性，心肌細(xì)胞間有結(jié)締組織增生，成纖維細(xì)胞增多，可見(jiàn)充血現(xiàn)象。CIH+Tan IIA組心肌細(xì)胞排列較CIH組整齊，心肌細(xì)胞呈桿狀，核染色質(zhì)分布較CIH組均勻，著色淺，成纖維細(xì)胞減少。
　　6丹參酮IIA對(duì)CIH大鼠血漿ET-1、血清NO含量的影響
　　較常氧組相比，CIH組大鼠的血漿ET-1含量明顯升高，而血清中NO含量明顯降低（P＜0.05）；與CIH組比較

16、，CIH+Tan IIA組大鼠血漿ET-1含量明顯降低，血清中NO含量顯著升高（P＜0.05）。
　　7免疫組化觀察丹參酮 IIA對(duì) CIH大鼠心肌 ET-1、ETA和 ETB受體的表達(dá)影響
　　較常氧組相比，CIH組的 ET-1表達(dá)明顯升高，ETA受體表達(dá)增加，而CIH+Tan IIA組的ET-1和ETA受體的表達(dá)明顯降低。與常氧組比較，CIH組中ETB受體明顯降低，而CIH+Tan IIA組的ETB受體高于CIH組。

17、r>　　8 Western blot檢測(cè)丹參酮IIA對(duì)CIH大鼠心肌eNOS蛋白表達(dá)和ET-1及其受體蛋白表達(dá)的影響
　　較常氧組相比，CIH組的 ET-1蛋白表達(dá)量明顯增加，ETA受體的蛋白表達(dá)量增加，而CIH+Tan IIA組的ET-1和ETA受體的蛋白表達(dá)量明顯減少。與常氧組比較， CIH組中 ETB受體明顯減少，而CIH+Tan IIA組的ETB受體卻高于CIH組。CIH組eNOS的蛋白表達(dá)量較常氧組減少，而CIH+Tan