降膽固醇功能乳桿菌的篩選及降解機(jī)理研究.pdf

1、膽固醇攝入過(guò)量帶來(lái)的高脂血癥、冠心病、動(dòng)脈硬化等心血管疾病已經(jīng)嚴(yán)重危害到人體健康，如何減少膽固醇攝入量、降低人體血清膽固醇水平的研究越來(lái)越受到廣泛關(guān)注。國(guó)外已有大量關(guān)于乳酸菌降膽固醇作用的文獻(xiàn)報(bào)道，但具體的篩選指標(biāo)、去除機(jī)理等尚不明確，本研究旨在分離出來(lái)源于健康人體腸道的乳桿菌菌株，通過(guò)耐膽鹽能力、生長(zhǎng)能力、體外降膽固醇量、去結(jié)合膽鹽能力等一系列指標(biāo)評(píng)價(jià)乳桿菌菌株的降膽固醇綜合性能，篩選出具有很好的降膽固醇性能的潛力菌株用于益生菌制劑的

2、開發(fā)應(yīng)用，同時(shí)通過(guò)引入膽酸－膽固醇共沉淀曲線、有無(wú)添加膽汁鹽時(shí)菌株體外去除膽固醇量比較等方法探討乳桿菌降膽固醇作用的機(jī)理，為優(yōu)良菌株的篩選提供理論指導(dǎo)。 首先通過(guò)選擇性培養(yǎng)基平板涂布法篩選得到若干乳桿菌，經(jīng)革蘭氏染色選出陽(yáng)性且形態(tài)特征符合乳桿菌的菌株。用乳桿菌特異引物將分離得到的細(xì)菌總DNA進(jìn)行PCR擴(kuò)增，得到500bp左右乳桿菌特異片段，將產(chǎn)物進(jìn)行測(cè)序，通過(guò)序列比對(duì)鑒定到種，用于進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)。 對(duì)6個(gè)種共14株乳桿菌的膽

3、鹽耐受性評(píng)價(jià)表明，有11株對(duì)2.8mM甘膽酸鈉和1.2mM?；悄懰徕c混合膽汁鹽耐受性很好，遲滯期小于2.00h，4株在6mM?；悄懰徕c膽汁鹽中遲滯期小于2.00h，且?guī)缀鯉缀跛芯陮?duì)甘膽酸鈉的耐受性比都對(duì)?；悄懰徕c更強(qiáng)。 菌株體外降膽固醇能力研究發(fā)現(xiàn)，有7株菌在添加2.8mM甘膽酸鈉和1.2mM?；悄懰徕c混合膽汁鹽的培養(yǎng)基中對(duì)膽固醇的去除量在20.00μg/ml以上，其中6株在6mM?；悄懰徕c中的去除量也高于20.00μg/m

4、l。且研究表明，降膽固醇能力具有明顯的菌株間差異。 菌株去結(jié)合膽鹽能力評(píng)價(jià)結(jié)果發(fā)現(xiàn)，去結(jié)合膽鹽能力同樣有明顯的菌株間差異。其中有4株的產(chǎn)膽酸量較高，在3.50-5.00μmol/ml之間。綜合三個(gè)篩選指標(biāo)發(fā)現(xiàn)，四株植物乳桿菌LS12， Lp501， Lp529和LS31作為降膽固醇益生菌制劑潛力菌株性能較好，可作為起始菌株進(jìn)一步優(yōu)化和研究。 對(duì)乳桿菌降膽固醇機(jī)理的研究發(fā)現(xiàn)，菌株體外降膽固醇是共沉淀與同化作用共同發(fā)生的結(jié)果