FFJ-5的體外抗腫瘤活性及其機(jī)制的研究.pdf

1、目的：研究大葉茜草素的結(jié)構(gòu)修飾物FFJ-5體外抗腫瘤活性及其對(duì)EGFR-Akt-PKM2信號(hào)通路的影響。
　　方法：MTT法檢測(cè)大葉茜草素及其結(jié)構(gòu)修飾物FFJ-5對(duì)A549和HepG2細(xì)胞生長(zhǎng)活力的影響；流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)FFJ-5對(duì)A549和HepG2細(xì)胞周期的影響；Hoechst33342/PI共染高內(nèi)涵活細(xì)胞成像系統(tǒng)分析FFJ-5對(duì)A549和HepG2細(xì)胞凋亡的影響；ATP Assay Kit檢測(cè) FFJ-5對(duì) A549和 He

2、pG2細(xì)胞內(nèi) ATP生成量的影響；激光共聚焦顯微鏡檢測(cè)BCECF-AM（pH熒光探針）孵育后，F(xiàn)FJ-5對(duì)A549和HepG2細(xì)胞內(nèi)pH的影響；Western blot檢測(cè)FFJ-5對(duì)A549和HepG2細(xì)胞中EGFR、p-EGFR、Akt、p-Akt、PKM2、PARP、Cleaved PARP、Caspase3和Cleaved Caspase3等蛋白表達(dá)量的影響；激光共聚焦顯微鏡檢測(cè)Rh123(Rhodamine123)染色后，F(xiàn)F

3、J-5對(duì)A549和HepG2細(xì)胞線粒體膜電位的影響。
　　結(jié)果：⑴MTT結(jié)果顯示：FFJ-5的抗腫瘤活性顯著增強(qiáng)，Mollugin在A549和 HepG2細(xì)胞中的IC50值是分別是FFJ-5的7.8倍、5.6倍。⑵流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)結(jié)果顯示：FFJ-5可呈濃度依賴性的使A549和HepG2細(xì)胞的周期阻滯在G2/M期。⑶Hochst33342/PI共染結(jié)果顯示：FFJ-5可呈濃度依賴性地誘導(dǎo)A549和HepG2細(xì)胞的凋亡。⑷Wester

4、n blot結(jié)果顯示：FFJ-5能夠呈濃度依賴性的下調(diào)蛋白EGFR、p-EGFR、Akt、p-Akt、PKM2的表達(dá)。⑸ATP檢測(cè)結(jié)果顯示：FFJ-5呈濃度依賴性地抑制A549和HepG2細(xì)胞內(nèi)ATP的生成。⑹BCECF-AM結(jié)果顯示：FFJ-5可呈濃度依賴性地使A549和HepG2細(xì)胞中pH值降低。⑺羅丹明123染色結(jié)果顯示：FFJ-5可呈濃度依賴性地促使A549和HepG2細(xì)胞線粒體膜電位降低。⑻Western blot結(jié)果顯示：F

5、FJ-5在A549、HepG2細(xì)胞中，可激活Caspase3，使Cleaved-Caspase3表達(dá)升高、導(dǎo)致PARP加速水解，Cleaved-PARP蛋白表達(dá)呈現(xiàn)濃度依賴性地升高。
　　結(jié)論：①FFJ-5可顯著抑制A549和HepG2細(xì)胞的生長(zhǎng)和增殖，使細(xì)胞阻滯在G2/M期，并呈濃度依賴性。②FFJ-5可下調(diào)PKM2蛋白表達(dá)，影響腫瘤細(xì)胞的能量代謝和腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)的酸性微環(huán)境。③FFJ-5可通過EGFR-Akt-PKM2信號(hào)通路抑