肝細胞死亡在慢性乙型肝炎病毒感染重癥化演變中的意義及機制研究.pdf

1、目的：探討肝細胞死亡水平在慢性乙型病毒性肝炎（Hepatitis B virus，HBV）感染重癥化演變中的臨床意義并探索肝細胞程序性壞死在乙肝相關肝衰竭中的作用。
　　方法：利用肝細胞死亡血清標志物，M30（肝細胞凋亡）及M65（總體死亡）對不同疾病階段的慢性HBV感染人群（n=405）做肝細胞死亡水平分析并以250例健康人群作正常對照。針對其中201例接受肝穿刺檢查的慢性HBV感染未經抗病毒治療的亞組患者分析肝細胞死亡水平與肝

2、內炎癥、纖維化之間的關系。探討 HBV相關慢加急性肝衰竭（Acute-on-chronic liver failure，ACLF）亞組患者（n=54）分析肝細胞死亡水平與 HBV-ACLF預后轉歸之間的關系。進一步利用臨床肝衰竭患者以及肝衰竭小鼠模型（LPS/D-GalN），明確肝細胞壞死亞型-程序性壞死是否參與疾病進展，并結合抑制劑以及基因編輯方法嘗試探索程序性壞死在肝衰竭中的作用。
　　結果：慢性HBV感染患者血清M30抗原及

3、M65抗原顯著（P均<0.001）高于健康人群。斯皮爾曼相關性分析結果示M30及M65抗原均與谷丙轉氨酶、谷草轉氨酶、總膽紅素、肝硬度、APRI評分、FIB-4評分、HBV-DNA、凝血酶原時間、國際化標準比值（INR）、CTPs及MELD評分等呈現顯著正相關性（P<0.001）。血清M30及M65水平在HBV相關慢加急性肝衰竭患者顯著高于單純肝硬化失代償患者、肝硬化代償期以及非肝硬化患者。進一步對未曾接受抗病毒治療并在我院進行肝臟穿刺

4、術的患者（n=201）做亞組分析。結果顯示肝組織存在顯著病變（顯著性炎癥壞死和/或顯著性纖維化，significant histological lesions，SHL）的慢性HBV感染患者較非SHL患者血清M30及M65水平顯著升高。另一方面，在HBV-ACLF亞組的分析預后分析中，3個月死亡的HBV-ACLF患者組的基線血清M30和M65水平顯著（P<0.001）高于存活患者組。兩者在區(qū)分HBV-ACLF患者住院3個月后存活或死亡的

5、AUCs分別為0.86及0.83。選取M30>750 U/L及M65>5000 U/L作為閾值進一步分析得，基線M30>750 U/L的HBV-ACLF患者，較基線M30≤750 U/L患者預后明顯更差(Cumulative death ratio,30 day:71.4％vs.11.6%,90 day:89.3%vs.26.9%，P<0.001)。相似地，基線M65>5000的HBV-ACLF患者，較基線M65≤5000 U/L患者預

6、后明顯更差(Cumulative death ratio,30 day:78.6% vs.7.7%,90 day:85.7% vs.26.9%，P<0.001)。在校正了潛在的影響因素后，基線高水平肝細胞死亡與HBV-ACLF患者預后不佳獨立相關。基于單、多因素Cox回歸構建的MELD-CD模型，在經重抽樣校正后，Harrell’s C-index為0.86，顯著優(yōu)于MELD、MELD-NA及CTPs評分。動態(tài)分析結果顯示預后不佳的HB

7、V-ACLF患者基線高水平的肝細胞壞死繼續(xù)持續(xù)升高。進一步，我們在HBV-ACLF患者中均發(fā)現了肝細胞壞死亞型，程序性壞死參與肝衰竭疾病進展，并在肝衰竭動物模型得到了驗證。利用腺病毒感染技術在體過表達程序性壞死關鍵執(zhí)行分子MLKL能夠加重肝衰竭小鼠肝損傷程度，加速肝衰竭小鼠死亡。而利用NEC-1抑制程序性壞死關鍵上游調控分子RIPK1則能夠顯著降低肝衰竭小鼠死亡率。
　　結論：慢性HBV感染患者升高的肝細胞死亡水平與肝內炎癥、纖維