腐熟用枯草牙孢桿菌菌劑的研制.pdf

1、腐熟菌劑主要是指針對畜禽糞便，植物殘體以及一些生活廢棄物等難分解的有機物進行處理而研究生產出的一類微生物菌劑，廣泛應用農作物秸稈、畜禽糞便的資源化和無害化處理。枯草芽孢桿菌是在自然界廣泛存在的一種好氧的產芽孢桿菌。它可以產生蛋白酶、淀粉酶、纖維素酶和半纖維素酶等酶，是農作物秸稈、畜禽糞便等有機物料腐熟菌劑的主要菌種之一。芽孢數和有效活菌數是腐熟菌劑質量的重要指標。生產成本也是微生物菌劑生產企業(yè)所關心的重要問題。本課題研究了枯草芽孢桿菌D

2、K36的產芽孢條件，優(yōu)化了發(fā)酵工藝。在此基礎上，研究了菌劑的制備工藝。為了降低生產成本，進行了以脫酚棉籽蛋白為氮源培養(yǎng)枯草芽孢桿菌DK36的研究。其主要研究結果如下:
　　1)枯草芽孢桿菌DK36的產芽孢條件研究。當葡萄糖、蔗糖、果糖、可溶性淀粉、玉米粉、麩皮為碳源時，菌體生長良好。葡萄糖和蔗糖作碳源時均不產生芽孢。當麩皮作為碳源時，形成的芽孢最多。其次為玉米粉、可溶性淀粉。蛋白胨、酵母浸粉、大豆蛋白胨、豆餅粉、硝酸鉀、硝酸鈉、硝

3、酸銨均可使菌體大量形成芽孢，其中大豆蛋白胨的效果最好。尿素抑制菌體生長和芽孢形成。添加Ca2+、Mg2+、Na+、Fe2+、Mn2+均可促進芽孢的形成，其中效果最明顯的是硫酸錳。Cu2+對生長和形成芽孢均有很大抑制作用。產芽孢最佳培養(yǎng)基:麩皮15.0g/L、大豆蛋白胨5.0g/L、硫酸錳0.1g/L、碳酸鈣3.0g/L。最佳產芽孢發(fā)酵條件:培養(yǎng)溫度30℃、轉速200r/min、接種為2％、培養(yǎng)基初始pH為7.0，芽孢數達3.6×109c

4、fu/mL。
　　2)脫酚棉籽蛋白培養(yǎng)枯草芽孢桿菌DK36的研究。棉籽蛋白作為氮源時，菌體生長良好。碳源的種類對產芽孢有顯著影響。葡萄糖、蔗糖、玉米粉、麩皮均使菌體生長良好。但葡萄糖和蔗糖為碳源，菌體不形成芽孢，而玉米粉和麩皮可使菌體產生大量芽孢。添加Ca2+、Mn2+、Mg2+和K+對芽孢形成有明顯的促進作用，并且發(fā)現鉀鹽與鎂鹽、錳鹽、鈣鹽復合效果更佳。研究還發(fā)現，脫酚棉籽蛋白作為氮源會造成芽孢形成緩慢。脫酚棉籽蛋白培養(yǎng)枯草芽孢

5、桿菌的最佳培養(yǎng)基:玉米粉30.0g/L、棉籽蛋白30.0g/L、硫酸鎂2.0g/L、磷酸二氫鉀4.5g/L。其最佳發(fā)酵條件:培養(yǎng)溫度30℃、搖床轉速200r/min、接種量為8％，芽孢數和芽孢率分別達到3.5×109cfu/mL和98.7％。
　　3)枯草芽孢桿菌DK36菌劑的制備。盡管芽孢能耐高溫，但隨著干燥溫度升高，菌劑有效活菌數顯著下降。發(fā)酵液pH7.0時，菌劑活菌數最高。載體種類對菌劑質量影響十分顯著。麩皮、硅藻土和活性炭