桔梗皂苷D及金屬（釕、銥）配合物的抗腫瘤活性研究.pdf

1、目的：在腫瘤的治療方面，化學療法、手術治療和放射療法依然是常用的治療手段。為了達到更好的治療效果，近年來一些中藥中的有效成分在抗腫瘤作用也受到了眾多青睞。中藥桔梗皂苷中的主要有效成分桔梗皂苷D除了鎮(zhèn)咳祛痰、抗炎、抗氧化等藥理活性外，對多種腫瘤細胞也具有抗腫瘤活性。然而，對其抗腫瘤研究范圍仍不全面，并且作用機制也不明確。因此，還有許多問題需要解決。另外，就化學藥物而言，研究者早已認為釕、銥金屬配合物具有較好的抗腫瘤潛力。然而，并沒有對配合

2、物的抗腫瘤活性及其信號通路作出確切的定論。釕、銥金屬配合物的抗腫瘤機制仍需要深入探究。
　　方法：采用MTT法對桔梗皂苷D和釕、銥金屬配合物的體外抗腫瘤活性進行篩選；利用細胞內吞、AO/EB染色法和流式細胞術對藥物能否誘導細胞凋亡進行了定性定量分析；采用DCFH-DA、JC-1染色，借助熒光顯微鏡和流式細胞儀分別對藥物作用后細胞內活性氧水平、線粒體膜電位變化進行定性定量檢測；單細胞凝膠電泳檢測了藥物是否損傷了細胞DNA；AO染色法

3、檢測桔梗皂苷D是否引起細胞發(fā)生自噬；流式細胞術檢測細胞周期是否在藥物作用后受到阻滯；利用Transwell小室檢測藥物是否影響了細胞侵襲能力；Western blot免疫印跡法從分子水平來分析藥物對細胞內凋亡相關蛋白表達水平的影響。
　　結果：
　　(1) MTT實驗表明，桔梗皂苷D及合成的釕、銥金屬配合物各自的抗腫瘤活性不同，對某種特定的腫瘤細胞表現(xiàn)出較強的抗腫瘤活性。
　　(2) AO/EB染色法觀察到了藥物作用后

4、腫瘤細胞呈現(xiàn)出的凋亡形態(tài)特征；流式細胞術定量檢測了細胞凋亡水平，進一步確認了藥物誘導細胞發(fā)生了凋亡；同時也檢測出了細胞周期主要被阻滯在了G0/G1或G2/M期。
　　(3)用DCFH-DA、JC-1分別檢測細胞內活性氧水平和線粒體膜電位變化，在熒光顯微鏡下觀察到藥物作用后細胞內發(fā)出了明亮的綠色熒光，細胞內活性氧水平增加，線粒體膜電位下降；同時用流式細胞儀定量檢測了細胞內熒光強度，結果與顯微鏡下觀察的結果一致。
　　(4)單細

5、胞凝膠電泳實驗說明了桔梗皂苷D損傷了PC-12細胞的DNA，引起了DNA片段化。AO染色檢測細胞自噬表明桔梗皂苷D誘導PC-12細胞發(fā)生了自噬。
　　(5) Transwell小室檢測表明細胞侵襲能力受到了桔梗皂苷D及釕、銥金屬配合物較好地抑制。
　　(6) Western blot免疫印跡結果說明藥物作用后細胞內Caspase3、Bid和Bak蛋白表達出現(xiàn)了上調，同時Procaspase7、Bcl-2和Bcl-x蛋白表達出