硫丹引起HUVEC-C細胞骨架重構的機制分析.pdf

1、硫丹屬于持久性有機污染物，具有難降解性、生物蓄積性、長距離遷移性以及高毒性。本課題前期研究發(fā)現硫丹具有內皮細胞毒性，但硫丹對內皮細胞屏障功能的影響尚不清楚。本研究以人臍靜脈內皮細胞(HUVEC-C)為實驗對象，主要探討了硫丹對血管內皮細胞骨架的影響及其信號通路，并著重分析了由于細胞骨架重構而引起的血管內皮通透性改變的分子機制。
　　本研究利用免疫染色法分析了硫丹暴露對HUVEC-C細胞骨架的微絲結構(F-actin)和粘著斑激酶(

2、FAK)分布的影響，用qRT-PCR方法測定了骨架相關基因ROCK2和PXN的mRNA表達水平。用蛋白印記法(Western blot)分析了基質金屬蛋白酶（MMP-3）、層粘連蛋白(LAMC1)、FAK和pFAK的表達。用RNAi干擾的方法探討了LAMC1對HUVEC-C細胞存活率、細胞骨架和內皮細胞通透性的影響。用Western blot和qRT-PCR方法分別檢測了細胞間粘附連接蛋白E-cadherin和β-catenin及縫隙連

3、接關鍵因子Cx43的變化。最后利用Coastertranswell system探討了硫丹暴露影響HUVEC-C細胞通透性的時間和劑量效應。
　　結果發(fā)現，硫丹暴露能夠引起HUVEC-C細胞骨架破壞，ROCK2和PXN的mRNA表達降低，MMP-3蛋白表達升高而降解LAMC1，引起FAK和pFAK的表達降低，這些提示硫丹暴露可能通過影響MMP3/LAMC1/pFAK信號通路而破壞內皮細胞骨架。LAMC1 siRNAs顯著降低HUV

4、EC-C細胞生存率，引起細胞骨架破壞和內皮細胞通透性升高，說明LAMC1在維持血管內皮細胞結構與功能中起重要作用。硫丹通過降低E-cadherin和β-catenin表達而影響內皮細胞間連接。硫丹使縫隙連接功能減弱，與Cx43的表達降低有關。硫丹暴露48h導致內皮細胞通透性的升高，具有劑量效應關系。
　　本研究揭示了硫丹能夠通過破壞血管內皮細胞骨架的微絲結構，減弱細胞間粘附連接和縫隙連接功能，從而引起了內皮細胞的通透性增加，影響血