從腦腸互動研究涼血通瘀方對腦出血大鼠的神經(jīng)保護機制.pdf

1、目的:建立與臨床急性腦出血相近的自體尾動脈注血誘發(fā)腦出血大鼠模型。立足于“腦腸互動”學說，從神經(jīng)組織學、神經(jīng)病理學、神經(jīng)分子生物學等領域研究涼血通瘀方治療腦出血繼發(fā)性腦損害的神經(jīng)保護作用機制。
　　方法:
　　1、選擇SPF級SD雄性大鼠，隨機分為正常組、假手術組、造模組，按照自體尾動脈血注射方法制備腦出血模型。根據(jù)行為學評分和腦組織形態(tài)學改變觀察造模情況。
　　2、造模組隨機分為模型組、涼血通瘀組、通腑瀉熱組和涼血散

2、瘀組，每組6只，分別于用藥1d、3d、5d后觀察相應指標。
　　3、觀察并記錄大鼠行為學評分、測定大鼠腦血腫含量及腦組織水腫含量以觀察涼血通瘀方對腦出血大鼠神經(jīng)功能缺損的影響。
　　4、觀察大鼠排便情況、檢測腸道活力探討涼血通瘀方對腦出血大鼠腸道功能的影響。
　　5、應用免疫組化法檢測大鼠腦組織NGF、nNOS表達，應用硝酸還原法測定大鼠腦組織NO含量，應用WST-8法檢測大鼠腦組織和血清SOD含量、硫代巴比妥酸法檢測

3、大鼠腦組織和血清MDA含量。上述方法探討涼血通瘀方干預腦出血大鼠神經(jīng)修復及減輕腦損害的作用機制。
　　6、應用免疫組化法檢測大鼠腦、腸組織CCK-8蛋白表達，觀察涼血通瘀方對腦出血大鼠腦腸肽CCK-8的影響。
　　結果:
　　1、腦出血模型建立，造模組與正常組、假手術組比較均出現(xiàn)行為學評分明顯升高(P＜0.01)，腦組織形態(tài)學染色見類圓形血腫區(qū)。假手術組行為學評分為0分，未引起神經(jīng)功能缺損，腦組織形態(tài)學染色未見血腫區(qū)。

4、
　　2、行為學評分及腦組織血腫含量、含水量測定結果
　　2.1行為學評分:造模各組與正常組、假手術組比較均出現(xiàn)不同程度神經(jīng)功能缺損(P＜0.01)。隨時間推移，造模各組評分逐漸下降。用藥3d、5d涼血通瘀組Logna評分均低于模型組(P＜0.05)。用藥5d涼血通瘀組、通腑瀉熱組平衡木評分低于模型組(P＜0.05)。提示涼血通瘀方、通腑瀉熱方均能改善腦出血大鼠神經(jīng)功能缺損情況，其中涼血通瘀方的效果更為明顯。
　　2.

5、2腦組織血腫含量測定，模型組和用藥組在1d血腫含量相似(P＞0.05);3d后涼血通瘀組血腫含量低于模型組腦(P＜0.05);5d涼血通瘀組、涼血散瘀組均低于模型組(P＜0.01，P＜0.05)，其中涼血通瘀組血腫減少更為明顯(P＜0.01)。提示涼血通瘀方、涼血散瘀方均可促進血腫消散，涼血通瘀方效果更為明顯。
　　2.3腦組織含水量測定，用藥1d造模各組大鼠腦組織含水量均明顯高于假手術組(P＜0.01，P＜0.05)。3d模型組

6、大鼠含水量明顯高于假手術組(P＜0.01)，各用藥組腦含水量均明顯低于模型組(P＜0.01)，涼血通瘀組低于涼血散瘀組(P＜0.05)。5d后各用藥組含水量均明顯低于模型組(P＜0.01)，涼血通瘀組含水量低于通腑泄熱組和涼血散瘀組(P＜0.05，P＜0.01)。提示涼血通瘀方、通腑瀉熱方、涼血散瘀方均能不同程度減輕腦水腫，涼血通瘀方效果最明顯。
　　3、排便情況觀察及腸道功能檢測結果
　　3.1排便情況觀察，模型組大鼠排便

7、總粒數(shù)、黑便粒數(shù)均明顯少于假手術組(P＜0.01)，提示腦出血后出現(xiàn)排便減少。涼血通瘀組黑便所占百分比明顯高于模型組(P＜0.01)，且黑便粒數(shù)及所占百分比高于涼血散瘀組(P＜0.01)。通腑瀉熱組排便總粒數(shù)、黑便粒數(shù)及所占百分比均明顯高于模型組(P＜0.01)，且明顯高于涼血通瘀組和涼血散瘀組(P＜0.01)。提示涼血通瘀方、熟大黃均能促進排便，改善腦出血后便秘情況，其中熟大黃單方排便作用更為明顯。
　　3.2腸道活力檢測，各時

8、間點正常組與假手術組腸段收縮頻次、振幅及腸道活力值均明顯高于模型組(P＜0.01)，提示腦出血后腸道活力下降。模型組和各用藥組腸道活力值在3d、5d后逐漸增加，涼血通瘀組腸道活力值增高明顯，通腑瀉熱組次之，兩組腸道活力值均高于模型組和涼血散瘀組(P＜0.05，P＜0.01)。提示涼血通瘀方、熟大黃均能增加腸道活力、促進腸道蠕動。
　　4、腦損傷修復及腦保護相關指標(NGF、nNOS、NO、SOD、MDA)檢測結果
　　4.1

9、腦組織NGF表達，不同時間點涼血通瘀組NGF表達高于模型組、涼血散瘀組(P＜0.05，P＜0.01)，且在用藥3d高于通腑瀉熱組(P＜0.05)。提示涼血通瘀方可增強腦組織NGF表達。
　　4.2腦組織nNOS表達，各時間點模型組nNOS含量表達高于假手術組(P＜0.05)。3d涼血通瘀組nNOS含量表達低于模型組(P＜0.05)。5d涼血通瘀組、通腑瀉熱組和涼血散瘀組nNOS含量表達均低于模型組(P＜0.01，P＜0.05)。<

10、br>　　大鼠腦組織NO含量比較，用藥3d模型組明顯高于假手術組(P＜0.01);涼血通瘀組、通腑瀉熱組、涼血散瘀組明顯低于模型組(P＜0.01)。用藥5d涼血通瘀組、通腑瀉熱組明顯低于模型組(P＜0.01，P＜0.05)，其中涼血通瘀組NO含量最低(P＜0.05)。
　　上述結果提示各用藥組均可減輕nNOS表達、減少NO含量，涼血通瘀方效果最明顯。
　　4.3大鼠腦組織SOD活力比較，用藥1d、3d涼血通瘀組、通腑瀉熱組S

11、OD活力均高于模型組(P＜0.05，P＜0.01)。5d涼血通瘀組高于模型組(P＜0.05)。大鼠血清SOD酶活力比較，用藥3d涼血通瘀組高于模型組和涼血散瘀組(P＜0.05，P＜0.01)。提示涼血通瘀方、通腑瀉熱方均可增強SOD活力，涼血通瘀方效果更為明顯。
　　4.4大鼠腦組織MDA含量比較，涼血通瘀組在用藥1d、3d、5d均低于模型組(P＜0.05)。通腑瀉熱組在用藥1d、3d低于模型組(P＜0.05，P＜0.01)。涼血

12、散瘀組在3d明顯低于模型組(P＜0.05)。大鼠血清MDA含量比較:用藥3d涼血通瘀組、通腑瀉熱組均低于模型組(P＜0.01);5d各用藥組血清MDA含量均低于模型組(P＜0.05)。提示各用藥組均可減少過氧化物MDA含量，涼血通瘀方效果最為明顯。
　　5、腦組織、腸組織CCK-8表達結果
　　5.1腦組織CCK-8表達，用藥1d通腑瀉熱組、涼血散瘀組CCK-8表達高于假手術組、模型組(P＜0.01，P＜0.05)，其中通腑

13、瀉熱組表達最高，提示在1d通腑瀉熱方可明顯促進血腫周圍CCK-8蛋白表達。用藥3d涼血通瘀組CCK-8表達最高(P＜0.05)。在5d各用藥組CCK-8表達均明顯高于模型組(P＜0.01)，其中涼血通瘀組最高(P＜0.05)。
　　5.2腸組織CCK-8表達，1d涼血通瘀組高于假手術組、模型組、涼血散瘀組(P＜0.05，P＜0.01)。3d涼血通瘀組最高，通腑瀉熱組次之，均高于假手術組、模型組和涼血散瘀組(P＜0.05，P＜0.0

14、1)。
　　結論:
　　1、腦出血大鼠自體尾動脈血注入法造模成功。
　　2、涼血通瘀方、通腑瀉熱方均能改善腦出血大鼠神經(jīng)功能缺損情況，其中涼血通瘀方的效果更為明顯。
　　3、涼血通瘀方和通腑瀉熱方均可促進排便，增加腦出血大鼠腸道活力值，大黃制劑（通腑瀉熱組）具有更顯著的通便作用，二者皆可改善腦出血大鼠腸道功能障礙，增加腸道蠕動。
　　4、涼血通瘀方、通腑瀉熱方、涼血散瘀方皆可不同程度降低繼發(fā)性腦損害相關指標