肺靶向的磷酸特地唑胺陽離子脂質體的構建及體內外評價.pdf

1、磷酸特地唑胺(Tedizolid phosphate)是第二代新型惡唑烷酮類抗菌藥，由美國CUBIST生物制藥公司研發(fā)。作為特地唑胺的前藥，在口服或靜脈注射后，磷酸特地唑胺能通過磷酸酯酶的催化轉化為特地唑胺。特地唑胺的抗菌機理是與細菌核糖體的50S亞基結合，從而抑制合成細菌蛋白質并發(fā)揮抗菌效果。因此，它與其它抗菌藥發(fā)生交叉耐藥的現象較為少見。臨床研究表明，與利奈唑胺（第一代惡唑烷酮類抗菌藥）相比，磷酸特地唑胺的半衰期更長，臨床療效更好，

2、且縮短了近一半的治療周期。然而，磷酸特地唑胺在室溫下不穩(wěn)定，易水解，貯藏和運輸不便。用于肺炎的治療，肺部靶向性不高。而單純靠增加劑量來提高肺部藥物濃度和平均滯留時間，會導致耐藥性發(fā)生的風險。
　　脂質體，作為一種極具潛力的緩控釋系統，水溶性藥物和脂溶性藥物皆可被其包封。尤其作為抗菌藥物載體有著諸多優(yōu)勢:①.改善藥物代謝動力學和生物學分布;②.提高抗菌藥的抗菌效果并降低致病菌對于抗菌藥物的耐藥性;③.具有部位靶向選擇性。此外，粒徑和

3、電位是影響脂質體被動肺靶向的重要因素。因此，陽離子脂質體除具有以上優(yōu)勢外，由于粒徑較普通脂質體大且荷正電具有較好的肺靶向性，可以提高肺部的藥物濃度及有效濃度維持時間;還可以減少脂質體在貯存期間的粒徑變化，維持脂質體的穩(wěn)定性?？傊?，對于抗菌藥載體來說，陽離子脂質體不僅穩(wěn)定性和肺靶向性有所提高，而且具有生物膜親和性強，對于肺炎的治療具有不可替代的優(yōu)勢。
　　本課題以磷酸特地唑胺為模型藥物，以注射用大豆卵磷脂和膽固醇為膜材，采用逆相蒸發(fā)

4、法法制備磷酸特地唑胺陽離子脂質體。目的在于提高磷酸特地唑胺的穩(wěn)定性和部位靶向性，改善治療效果，降低耐藥性的發(fā)生。本課題的主要內容包括磷酸特地唑胺普通脂質體和陽離子脂質體的制備及性質表征;體外釋藥性和初步安全性評價;小鼠體內藥物動力學及組織分布試驗研究評價磷酸特地唑胺陽離子脂質體的緩釋性和靶向性。
　　1.磷酸特地唑胺普通脂質體的制備與性質表征
　　建立了紫外分光光度法(UV)測定磷酸特地唑胺的含量，方法學考察結果表明:輔料對

5、藥物的含量測定干擾較小，且精密度和回收率的結果也都滿足測定的要求。超濾離心法具有高回收率，重現性好等優(yōu)點，因此可用于測定脂質體的包封率。根據磷酸特地唑胺的溶解特性，選擇粒徑、包封率和載藥量為考察指標，對制備方法和處方工藝進行了較為系統的研究。最后確定了采用逆相蒸發(fā)法來制備磷酸特地唑胺的脂質體，并結合單因素試驗和正交試驗，最終優(yōu)選出最佳的處方工藝;按照最佳處方工藝制備的磷酸特地唑胺脂質體形狀呈類球形，且大小分布均勻，平均粒徑為(184.9

6、±8.3) nm，平均Zeta電位為(-22.8±0.15) mV，包封率為(55.10±1.94)％，載藥量為(4.51±0.24)％，平均pH值為6.83±0.06，符合注射要求;處方和制備工藝合理可行。
　　2.磷酸特地唑胺陽離子脂質體的制備與性質表征
　　分別制備了殼聚糖包裹的磷酸特地唑胺脂質體(c-TDZA-Lips)和硬脂胺修飾的磷酸特地唑胺脂質體(SA-TDZA-Lips)，通過對分子量、用量、體積比以及電位等

7、單因素進行考察，確定了c-TDZA-Lips的最佳處方。通過對電位的單因素考察，確定了SA-TDZA-Lips的最優(yōu)處方。制備的c-TDZA-Lips和SA-TDZA-Lips在透射電鏡下觀察均呈類球形，大小分布均勻。兩種磷酸特地唑胺陽離子脂質體的Zeta電位均從荷負電轉變成了荷正電。c-TDZA-Lips和SA-TDZA-Lips的粒徑分別為(214.3±4.2) nm和(194.9±2.93)nm，平均Zeta電位分別為(19.5±

8、2.10) mV和(20.4±1.10) mV，包封率分別為(55.38±2.18)％和(53.52±2.18)％，平均pH值分別為4.30和8.86，符合注射要求;三批脂質體的重現性試驗結果表明，處方工藝重現性良好，制備工藝可行。
　　3.磷酸特地唑胺普通脂質體與陽離子脂質體的體外釋藥性及初步安全性評價
　　采用動態(tài)膜透析法比較TDZA-Lips，c-TDZA-Lips和SA-TDZA-Lips三種磷酸特地唑胺脂質體制劑的

9、體外釋放特性。相比于TDZA-Inj組，TDZA-Lips，c-TDZA-Lips和SA-TDZA-Lips三種脂質體體外釋藥曲線相似，均具有不同程度的緩釋效果，且釋放曲線與weibull方程相符。其中c-TDZA-Lips釋放相對更緩慢，SA-TDZA-Lips次之。另外，從體外溶血試驗的結果來看，TDZA-Lips和SA-TDZA-Lips都未發(fā)現溶血或凝集，因此制劑安全可靠，可供靜脈注射。而c-TDZA-Lips除2號管以外，其余

10、試管均出現不同程度的溶血，初步安全性不合格，不可用于靜脈注射。
　　4.體內藥物動力學和組織分布研究
　　建立了高效液相色譜法(HPLC)測定磷酸特地唑胺在小鼠血漿和各組織器官中的濃度。以磷酸特地唑胺注射劑為對照制劑，研究小鼠尾靜脈注射TDZA-Lips和SA-TDZA-Lips后的血漿藥物動力學和在心、肝、脾、肺、腎、腦等組織中分布的變化，計算了各個制劑組在小鼠體內藥物動力學參數和體內各組織器官的靶向參數。小鼠體內藥物動力

11、學研究結果表明，與TDZA-Inj組相較，TDZA-Lips組和SA-TDZA-Lips組的平均滯留時間（MRT0-6）分別延長到2.39倍、2.80倍，血漿清除率CL分別減少了0.64倍和0.71倍，消除半衰期分別延長到1.15和1.51倍，AUC0-∞分別增加了1.76倍和2.40倍。這些變化都有助于提高磷酸特地唑胺的抗菌效果。小鼠體內組織分布試驗結果表明，經硬脂胺修飾后的SA-TDZA-Lips組在肺部的AUC增加了0.72倍。這

12、是由于經硬脂胺修飾后的脂質體帶有正電荷，與肺部細胞的親和力增強，攝取增加。SA-TDZA-Lips組在肺部的相對攝取率Re為1.527＞1，具有肺靶向性。這些均說明硬脂胺的修飾使得脂質體在肺部的分布增加，靶向性增強，這對于肺部炎癥的治療有很大優(yōu)勢。
　　綜上，本研究構建的硬脂胺修飾的磷酸特地唑胺陽離子脂質體，與預期的藥物動力學和組織分布特點相符。由于抗菌藥應用廣泛，是大部分抗感染治療的基本原則。因此，此項研究所構建的磷酸特地唑胺陽