人臍源性胰島前體細胞移植治療1型糖尿病的實驗研究.pdf

1、目的:
　　評價hUMSCs在體外誘導(dǎo)為胰島前體細胞后治療T1D大鼠的效果。
　　方法:
　　1.分離、培養(yǎng)及鑒定hUMSCs；2.取第4代hUMSCs采用分階段聯(lián)合誘導(dǎo)方法誘導(dǎo)并觀察誘導(dǎo)后細胞形態(tài)變化；3.分別取誘導(dǎo)后第7d、14d和21d細胞進行免疫熒光技術(shù)檢測Ngn3、胰島素和MafA表達；Western-blot法檢測誘導(dǎo)后第7d、14d和21d細胞MafA和Glut2蛋白表達；4.選擇正常雄性SD大鼠44只，

2、隨機分為誘導(dǎo)細胞組、干細胞組、模型組和正常組，正常組給予生理鹽水，余均給予鏈脲佐菌素腹腔注射建立T1D模型；5.將經(jīng)CM-DIL標(biāo)記的胰島前體細胞移植到糖尿病大鼠胰腺被膜下，實驗周期為60天，分為2W、4W、6W、8W四個時間段，觀察各組血糖和體重變化情況；HE染色觀察大鼠胰島形態(tài)；Western-blot法檢測各時期各組MafA表達改變；分析移植后MafA和大鼠血糖相關(guān)性；分析MafA在干細胞組和誘導(dǎo)細胞組之間的表達差異性。
　

3、　結(jié)果:
　　1.成功分離培養(yǎng)出hUMSCs，誘導(dǎo)后細胞形態(tài)寬大、出現(xiàn)集落；2.免疫熒光技術(shù)檢測Ngn3、胰島素和MafA蛋白均為陽性表達；Western-blot檢測誘導(dǎo)后細胞MafA在正常組和7d時幾乎無表達，14d和21d組稍增高，Glut2在7d增高，14d時達高峰，21天時稍弱；3.共有38只大鼠成模，實驗組大鼠血糖于第7天時升高；細胞移植后，干細胞組和誘導(dǎo)細胞組血糖均不同程度下降，但誘導(dǎo)細胞組降低更明顯，模型組仍維持在

4、高血糖狀態(tài)；模型組體重在整個實驗過程中呈現(xiàn)持續(xù)降低，誘導(dǎo)細胞組和干細胞組體重均在第4周后呈升高趨勢；4. Western-blot法顯示移植后各組均能檢測到MafA表達且均呈升高趨勢，干細胞組在第6W時明顯升高，誘導(dǎo)細胞組在第4W時明顯升高；移植后MafA和血糖相關(guān)性兩組均呈負性相關(guān)；MafA在干細胞組和誘導(dǎo)細胞組之間的表達無差異性。
　　結(jié)論:
　　人臍帶間充質(zhì)干細胞在微環(huán)境下誘導(dǎo)可誘導(dǎo)分化為胰島前體細胞，干細胞和胰島前體