人臍源性胰島前體細胞移植治療1型糖尿病的實驗研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、目的:
  評價hUMSCs在體外誘導為胰島前體細胞后治療T1D大鼠的效果。
  方法:
  1.分離、培養(yǎng)及鑒定hUMSCs;2.取第4代hUMSCs采用分階段聯(lián)合誘導方法誘導并觀察誘導后細胞形態(tài)變化;3.分別取誘導后第7d、14d和21d細胞進行免疫熒光技術檢測Ngn3、胰島素和MafA表達;Western-blot法檢測誘導后第7d、14d和21d細胞MafA和Glut2蛋白表達;4.選擇正常雄性SD大鼠44只,

2、隨機分為誘導細胞組、干細胞組、模型組和正常組,正常組給予生理鹽水,余均給予鏈脲佐菌素腹腔注射建立T1D模型;5.將經(jīng)CM-DIL標記的胰島前體細胞移植到糖尿病大鼠胰腺被膜下,實驗周期為60天,分為2W、4W、6W、8W四個時間段,觀察各組血糖和體重變化情況;HE染色觀察大鼠胰島形態(tài);Western-blot法檢測各時期各組MafA表達改變;分析移植后MafA和大鼠血糖相關性;分析MafA在干細胞組和誘導細胞組之間的表達差異性。
 

3、 結果:
  1.成功分離培養(yǎng)出hUMSCs,誘導后細胞形態(tài)寬大、出現(xiàn)集落;2.免疫熒光技術檢測Ngn3、胰島素和MafA蛋白均為陽性表達;Western-blot檢測誘導后細胞MafA在正常組和7d時幾乎無表達,14d和21d組稍增高,Glut2在7d增高,14d時達高峰,21天時稍弱;3.共有38只大鼠成模,實驗組大鼠血糖于第7天時升高;細胞移植后,干細胞組和誘導細胞組血糖均不同程度下降,但誘導細胞組降低更明顯,模型組仍維持在

4、高血糖狀態(tài);模型組體重在整個實驗過程中呈現(xiàn)持續(xù)降低,誘導細胞組和干細胞組體重均在第4周后呈升高趨勢;4. Western-blot法顯示移植后各組均能檢測到MafA表達且均呈升高趨勢,干細胞組在第6W時明顯升高,誘導細胞組在第4W時明顯升高;移植后MafA和血糖相關性兩組均呈負性相關;MafA在干細胞組和誘導細胞組之間的表達無差異性。
  結論:
  人臍帶間充質(zhì)干細胞在微環(huán)境下誘導可誘導分化為胰島前體細胞,干細胞和胰島前體

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