腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞的異質(zhì)性與卵巢癌異質(zhì)性的關(guān)聯(lián).pdf

1、研究目的：
　　巨噬細(xì)胞根據(jù)其功能與表達(dá)細(xì)胞因子的不同，可以分為兩個(gè)極化方向：能夠殺死病原體與腫瘤的M1，以及促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的生長、遷移甚至侵襲能力的M2。后者在免疫組化或流式細(xì)胞檢測中常用CD68+CD206或CD68+CD163進(jìn)行M2細(xì)胞的特異標(biāo)記以進(jìn)行識(shí)別與分選。此外，M2細(xì)胞還可以細(xì)分為若干亞群，這些亞群之間在細(xì)胞因子及細(xì)胞表面分子的表達(dá)上均有所差異。近來多個(gè)實(shí)驗(yàn)證實(shí)，腫瘤組織的微環(huán)境內(nèi)有大量巨噬細(xì)胞，稱之為腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)

2、胞(TAM)，TAM在細(xì)胞表型上可能與M2更為相似;此外，腫瘤細(xì)胞也可以誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞向M2方向極化，IL-6、LIF、IFN-γ等細(xì)胞因子可能在這一誘導(dǎo)過程中起了重要作用。
　　另一方面，關(guān)于腫瘤細(xì)胞異質(zhì)性的研究一直是腫瘤學(xué)的重點(diǎn)，除了腫瘤細(xì)胞本身的異質(zhì)性，腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞是否也具有異質(zhì)性即是本實(shí)驗(yàn)所討論的重點(diǎn)。通過不同類型的卵巢癌細(xì)胞系與單一來源的巨噬細(xì)胞進(jìn)行相互作用，以期找到其中的差異性及其背后的原因。
　　研究方法：<

3、br>　　1.利用聚酯透明膜transwell使卵巢癌細(xì)胞與巨噬細(xì)胞系進(jìn)行非接觸性共培養(yǎng)，誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞極化;
　　2.利用流式細(xì)胞術(shù)對誘導(dǎo)后的巨噬細(xì)胞進(jìn)行分群分析，計(jì)算CD68+CD206雙陽性細(xì)胞（即M2細(xì)胞）占全部CD68陽性細(xì)胞（即巨噬細(xì)胞）的比例，比較不同誘導(dǎo)條件下M2細(xì)胞極化比例的差異，及其隨時(shí)間的變化;
　　3.收集經(jīng)不同條件誘導(dǎo)極化的巨噬細(xì)胞的上清，利用ELISA對細(xì)胞上清中的細(xì)胞因子濃度進(jìn)行測定與分析;

4、>　　4.將經(jīng)過不同誘導(dǎo)條件極化的巨噬細(xì)胞與A2780反向共培養(yǎng)一定時(shí)間后，測定不同組A2780生長速率的變化以及細(xì)胞因子表達(dá)上的差異;
　　研究結(jié)果：
　　1.不同卵巢癌誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞向M2極化的能力不一樣，且群體中M2比例隨時(shí)間變化的規(guī)律也不同。
　　2.不同卵巢癌細(xì)胞誘導(dǎo)出的M2細(xì)胞分泌的細(xì)胞因子、對腫瘤細(xì)胞的生長促進(jìn)作用也具有異質(zhì)性，即不同腫瘤細(xì)胞誘導(dǎo)出的M2細(xì)胞本身也具備異質(zhì)性。
　　3.反向誘導(dǎo)72h后

5、，平均IL-10濃度與相應(yīng)腫瘤細(xì)胞生長速率呈現(xiàn)顯著正相關(guān)關(guān)系，提示IL-10可能通過巨噬細(xì)胞-卵巢癌的相互關(guān)系影響卵巢癌的增殖與發(fā)展。
　　4.永生化卵巢上皮細(xì)胞在誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞向M2極化方面表現(xiàn)出了與卵巢癌相似的特性，若比較永生化卵巢上皮細(xì)胞基因結(jié)構(gòu)與正常卵巢上皮細(xì)胞之間的差異，或許可提示巨噬細(xì)胞極化過程中有重要作用的基因。
　　研究結(jié)論：
　　卵巢癌細(xì)胞在誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞向M2極化方面具有異質(zhì)性，此種差異不僅存在于透明細(xì)