UBE2Q1的異常表達與肝細胞肝癌發(fā)生發(fā)展的相關性研究.pdf

1、目的：
　　肝細胞肝癌（hepatocellular carcinoma, HCC）是世界上最常見的癌癥之一。有研究報道，泛素蛋白酶體系統(tǒng)（ubiquitin-proteasome system,UPS）參與了蛋白質降解的調控，在HCC以及其他惡性腫瘤的病理生理學過程中扮演著關鍵角色。泛素接合酶E2Q1（ubiquitin-conjugating enzyme E2Q1, UBE2Q1）作為一種E2泛素接合酶類，可能參與了癌癥相關

2、蛋白的調控。本研究旨在分析UBE2Q1在HCC中的表達情況及其與HCC患者預后的關系，并進一步探討UBE2Q1的異常表達在HCC發(fā)生發(fā)展過程中的意義。
　　方法：
　　1.從組織學角度研究，首先通過Western blot方法，檢測在8對新鮮HCC及其對應的癌旁組織中UBE2Q1蛋白的表達情況；然后，運用免疫組化方法檢測86例HCC組織標本中UBE2Q1和增殖指標Ki-67的表達情況，并采用統(tǒng)計學方法分析UBE2Q1、Ki-

3、67的表達情況與HCC癌患者的性別、年齡、腫瘤體積大小、組織學分級以及腫瘤轉移等臨床病理因素之間的相關性。通過Kaplan-Meier法分析UBE2Q1的表達與HCC患者生存率之間的相關性；運用單因素和Cox危險比例模型多因素分析進一步探究UBE2Q1的表達與肝細胞肝癌患者預后之間的關系。
　　2.從細胞學角度研究，選取高表達UBE2Q1的BEL-7404、HepG2細胞株作為研究對象，血清饑餓釋放同步化處理后運用Western

4、blot方法檢測UBE2Q1蛋白表達水平變化，探究其在腫瘤細胞增殖過程中的潛在作用。
　　3.從分子生物學角度研究，通過小干擾RNA的方式下調BEL-7404、HepG2細胞中UBE2Q1的內(nèi)源性表達，然后采用 CCK-8、細胞流式分析等方法檢測 UBE2Q1表達的下調對細胞增殖以及細胞周期的影響。
　　結果：
　　1.免疫組化及Western blot法檢測均顯示，UBE2Q1在HCC組織中的表達明顯高于相對應的癌旁

5、肝組織。統(tǒng)計學分析提示UBE2Q1的表達強度與HCC組織學分級（P<0.001）之間的關系有統(tǒng)計學意義，相關性分析表明UBE2Q1與Ki-67表達呈正相關（r=0.639，P<0.01）；Kaplan-Meier分析顯示UBE2Q1在HCC中的高表達與患者總生存率的降低顯著相關（P=0.001）；單因素分析表明UBE2Q1與HCC患者的不良預后有關（P<0.001）；Cox比例風險模型分析顯示UBE2Q1可做為HCC患者預后的一種獨立指

6、標（P=0.002）。
　　2.通過血清饑餓的方式使BEL-7404、HepG2細胞生長周期停滯，血清釋放后刺激BEL-7404、HepG2細胞增殖；Western blot結果顯示UBE2Q1﹑PCNA蛋白隨著細胞周期的進展表達增加，而p53、p21蛋的白表達卻下降。
　　3. siRNA分析顯示，UBE2Q1表達的下調可引起B(yǎng)EL-7404、HepG2細胞增殖水平的下降及其細胞周期的停滯。
　　結論：
　　1

7、. UBE2Q1在HCC中高表達，并且可作為HCC患者一種獨立的預后指標。UBE2Q1的高表達提示HCC患者的預后不良。上述結果均說明UBE2Q1可能與HCC的發(fā)生發(fā)展有關。
　　2. UBE2Q1的表達在血清饑餓的BEL-7404、HepG2細胞中逐漸增加，提示UBE2Q1與HCC細胞的增殖過程相關。siRNA干擾BEL-7404、HepG2細胞中UBE2Q1的內(nèi)源性表達后，p53、p21在BEL-7404、HepG2細胞中的表