MRI示蹤干細(xì)胞同種異體修復(fù)兔關(guān)節(jié)軟骨缺損的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：
　　探討靜脈注射USPIO濃度為20mg/kg時(shí)，兔骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的標(biāo)記率及USPIO對(duì)兔骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞增殖性及多向分化能力的影響，并利用MRI活體示蹤USPIO標(biāo)記兔骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞移植修復(fù)兔關(guān)節(jié)軟骨缺損的進(jìn)程及信號(hào)強(qiáng)度，為進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)的USPIO靜脈注射濃度的設(shè)置提供實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。
　　方法：
　　(1)將6只新西蘭白兔完全隨機(jī)分為2組，每組3只，以組為單位，實(shí)驗(yàn)組經(jīng)耳緣靜脈注射20mg/kg USPIO，對(duì)

2、照組不做任何處理，48h后處死各組兔，分離、培養(yǎng)兔BMSCs至第三代作為實(shí)驗(yàn)對(duì)象；
　　(2)普魯士藍(lán)染色測(cè)量各組兔BMSCs的磁標(biāo)記率，增強(qiáng)型cck-8試劑盒觀察BMSCs增殖性強(qiáng)弱，并對(duì)各組兔BMSCs進(jìn)行多向誘導(dǎo)分化實(shí)驗(yàn)，觀察成骨、成脂、成軟骨能力的變化；
　?。?）將36只新西蘭白兔完全隨機(jī)分為4組，每組9只，制備兔雙膝關(guān)節(jié)軟骨缺損模型，實(shí)驗(yàn)組注入U(xiǎn)SPIO標(biāo)記兔 BMSCs-海藻酸鈉凝膠復(fù)合體，陽(yáng)性對(duì)照組注入未標(biāo)記

3、兔 BMSCs-海藻酸鈉凝膠復(fù)合體，陰性對(duì)照組注入純海藻酸鈉凝膠，空白組不做任何處理，分別于術(shù)后1個(gè)月、2個(gè)月、3個(gè)月進(jìn)行大體觀察和MRI掃描，并進(jìn)行組織學(xué)研究。
　?。?）收集數(shù)據(jù)，并進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。
　　結(jié)果：
　　（1）經(jīng)兔耳緣靜脈注射20mg/kg USPIO后提取、培養(yǎng)獲得的兔BMSCs與對(duì)照組兔BMSCs相比，細(xì)胞形態(tài)基本相同；
　　（2）普魯士藍(lán)染色顯示經(jīng)USPIO標(biāo)記的兔BMSCs胞質(zhì)內(nèi)可見大量藍(lán)

4、染顆粒，表明USPIO已被兔BMSCs吞噬；利用增強(qiáng)型CCK-8試劑盒反應(yīng)，通過(guò)自動(dòng)酶標(biāo)儀測(cè)得吸光度值繪制增殖曲線顯示，濃度為20mg/kg的USPIO不影響兔BMSCs的增殖活性；經(jīng)多向誘導(dǎo)分化實(shí)驗(yàn)后顯示，濃度為20mg/kg的USPIO不影響兔BMSCs的多向分化能力；
　?。?）BMSCs移植治療兔膝關(guān)節(jié)軟骨缺損顯示,隨著時(shí)間的遞增，標(biāo)記細(xì)胞移植組與未標(biāo)記細(xì)胞移植組的軟骨缺損逐漸被修復(fù)，純海藻酸鈉移植組與空白組的軟骨缺損修復(fù)

5、緩慢。
　?。?）統(tǒng)計(jì)學(xué)分析結(jié)果顯示，BMSCs移植治療兔膝關(guān)節(jié)軟骨缺損后，同時(shí)期標(biāo)記細(xì)胞移植組與未標(biāo)記細(xì)胞移植組的修復(fù)效果未見明顯差異（P>0.05），與純海藻酸鈉移植組、空白組修復(fù)效果相比有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P<0.05）；同時(shí)期標(biāo)記細(xì)胞移植組與未標(biāo)記細(xì)胞移植組的軟骨缺損處的SI未見明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P>0.05）。
　　結(jié)論：
　?。?）當(dāng)靜脈注射USPIO濃度為20mg/kg時(shí)，兔BMSCs可被USPIO標(biāo)記；