D-聚甘酯的藥代動力學-藥效學（PK-PD）及作用機制的系列研究.pdf

1、目的：1、建立D-聚甘酯的血漿濃度分析法，對比研究大鼠單次及連續(xù)7日靜脈注射和灌胃口服D-聚甘酯后的藥代動力學及藥效學，為該藥兩種劑型的給藥方案設計及在治療缺血性腦血管病中的藥物定位提供科學依據(jù)。2、建立大鼠大腦中動脈腦缺血再灌注動物模型，觀察D-聚甘酯對局灶性腦缺血再灌注大鼠的保護作用及腦組織內(nèi)的MDA，SOD，GSH-PX，TXB2，6-Keto-PGF<,1>。的含量，探討其可能的藥理作用機制。3、觀察不同分子量的D-聚甘酯對大鼠

2、的抗栓作用的研究。 方法：1、應用aPTT生物分析法檢測血漿D-聚甘酯濃度。采用DAS2.1.1版計算藥代動力學參數(shù)，半衰期(t<,1/2>)及消除速率常數(shù)按非房室模型計算。采用t-檢驗統(tǒng)計分析單次及連續(xù)7日給藥后的藥代動力學參數(shù)差異和靜脈給藥與灌胃口服的差異。2、采用栓線法建立大鼠局灶性腦缺血再灌注模型。連續(xù)靜脈注射給藥7天，TTC染色法測定腦缺血大鼠腦梗塞面積，干濕重法測定腦水腫，HE染色觀察腦組織形態(tài)。在IR24h、IR7

3、2h、IR144h，制成腦組織勻漿，按試劑盒方法分別測定MDA，SOD，GSH-PX，TXB2，6-Keto-PGF<,1>。的含量。3、正常大鼠注射不同分子量的D-聚甘酯后1h，測定血漿的凝血及抗栓指標。 結(jié)果：1、建立了aPTT延長效應的生物分析法。大鼠分別單次靜脈注射(9mg/kg)和灌胃口服(60mg/kg)D-聚甘酯后，藥時曲線符合二房室模型，權(quán)重系數(shù)采用1。末端消除速率常數(shù)Zata為0.89 h<'-1>～1.06

4、h<,-1>和消除半衰期t<,1/2z>為0.69h～0.78h，口服吸收少，生物利用度較低，約為3％～5％。表觀分布容積Vd遠小于1 L·kg<'-1>。連續(xù)7日靜脈注射9mg/kg和灌胃口服60mg/kg后，第7日給藥的藥代動力學參數(shù)比較與單次給藥相似，特別是Zata和t<,1/2z>與單次給藥結(jié)果基本一致，表明多次給藥并未影響本藥的消除和代謝，未出現(xiàn)多次給藥后藥物蓄積現(xiàn)象。大鼠在靜脈注射給予D-聚甘酯后，藥物的抗凝作用與血藥濃度同

5、步增高，約6h后，aPTT恢復至正常波動水平，藥物的抗凝效應消失，而連續(xù)給藥7日后，靜脈注射的aPTT最大值約為單次靜脈給藥的2倍，但灌胃口服卻未見抗凝效應的顯著增強。 2、D-聚甘酯、尼莫地平、低分子肝素給藥組，大鼠神經(jīng)功能缺失評分逐漸減輕，在IR144h與對照組相比(p<0.05)。并可明顯降低腦缺血再灌注大鼠的腦梗塞面積(p<0.05)。HE染色，對照組神經(jīng)細胞損傷及間質(zhì)水腫逐漸加重，給藥組可明顯降低神經(jīng)細胞死亡。對照組與

6、假手術(shù)組相比，D-聚甘酯的藥代動力/藥效學(PK/PD)及作用機制的系列研究MDA含量明顯增高(p<0.01)，SOD、GSH-PX含量明顯下降(p<0.05)。D-聚甘酯、尼莫地平給藥組的MDA含量在IR 144h明顯下降到再灌前的水平(p>0.05)，與對照組比較(p<0.05)，SOD、GSH-PX的含量與對照組IR 144h比較(p<0.05)。對照組與假手術(shù)組相比，TXB<,2>的含量在不同時間顯著增加(p<0.05)，6-K

7、eto-PGF<,1>的含量急劇降低(p<0.01)，TXB<,2>/6-Keto-PGF<,1>的比值明顯升高(p<0.01)。D-聚甘酯給藥組可明顯降低缺血側(cè)TXB<,2>含量，與假手術(shù)組、對照組、尼莫地平給藥組相比(p<0.05)，在IR144h，6-Keto-PGF<,1>。明顯上升，與假手術(shù)組相比(p>0.05)，與對照組、尼莫地平給藥組相比(p<0.05)，TXB<,2>/6-Keto-PGF<,1>。的比值隨時間，呈明顯降

8、低趨勢，與假手術(shù)相比(p>0.05)，在IRl44h與對照組、尼莫地平給藥組相比(p<0.05)。 3、D-聚甘酯Ⅰ，血漿APTT延長顯著，PT和FIB與對照組和低分子肝素組相比都有顯著性差異，抗FⅡa活性高于低分子肝素組和D-聚甘酯Ⅱ、Ⅲ組，有顯著性差異?？笷 Ⅹa/F Ⅱa比值，D-聚甘酯Ⅰ明顯低于其余各組。 結(jié)論：1、本試驗所建立的生物法來測定大鼠體內(nèi)血漿中的D-聚甘酯濃度，分析方法的特異性、靈敏度、精密度、回收率

9、等均基本滿足化學藥品藥物代謝動力學研究的技術(shù)要求。本研究表明D-聚甘酯抗凝效應與血漿藥物濃度同步，呈良好的線性相關關系，首次發(fā)現(xiàn)D-聚甘酯的大鼠血漿t<,1/2z>為1h左右，體內(nèi)發(fā)揮抗凝血效應時間約為6h，最大效應與血藥濃度間未出現(xiàn)滯后效應，大鼠單次及多次給藥對D-聚甘酯的主要藥代動力學參數(shù)無影響，連續(xù)7日應用未出現(xiàn)藥物蓄積，注射液藥理藥效藥代具有與低分子肝素相同的臨床特點，而灌胃口服則與阿司匹林的預防作用特點類似。 2、D-

10、聚甘酯連續(xù)給藥7天后，MCAO再灌注大鼠神經(jīng)功能缺失評分有明顯改善，可以降低大鼠的腦梗塞面積，并對腦缺血具有保護作用。D-聚甘酯可清除缺血性腦組織中的大量自由基，減輕自由基反應引起的腦損傷。D-聚甘酯使缺血性腦組織中TXB<,2>的含量明顯降低，對6-Keto-PGF<,1>的含量，開始降低而后可使其含量恢復到再灌注前水平，D-聚甘酯可顯著降低TXB<,2>/6-Keto-PGF的比值，具有抗血栓作用。 3、不同分子量的D-聚甘